【摘 要】
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为探究不同Hoechst 33342的染色浓度与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子进行分离及应用效果的影响，本实验采集6只关中奶山羊精液，使用浓度分别为10、11、12、13μL/m L的Hoechst 33342（5 mg/m L）染色液对精液样本进行染色，以流式细胞仪分离X精子和Y精子，应用3种不同冷冻程序冷冻精液，应用体外受精与胚胎发育技术评估关中奶山羊X、Y精液的分离准确性。结果表明：12μL
【基金项目】
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陕西省农业协同创新与推广联盟重大科技项目（LM ZD202002）； 陕西省科技协同创新项目（2018ZDCXL-NY-01-04）； 陕西省农业科学科技创新与推广项目（NYKJ-2019-YL16）；
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为探究不同Hoechst 33342的染色浓度与冷冻方法对关中奶山羊X、Y精子进行分离及应用效果的影响，本实验采集6只关中奶山羊精液，使用浓度分别为10、11、12、13μL/m L的Hoechst 33342（5 mg/m L）染色液对精液样本进行染色，以流式细胞仪分离X精子和Y精子，应用3种不同冷冻程序冷冻精液，应用体外受精与胚胎发育技术评估关中奶山羊X、Y精液的分离准确性。结果表明：12μL/m L Hoechst 33342染色条件下，奶山羊X、Y精子分离效率达到91.02%，高于10μL/m L和13μL/m L（P＜0.01），最高分选速度为4 134个/s（P＜0.05）；公羊个体的精液品质越好，其精子的分离速度越快，但对分离准确率的差异不显著；使用冷冻程序2进行关中奶山羊的X、Y精子冷冻的效果较好（P＜0.05）；体外受精48 h后，使用Y精子进行受精的卵细胞的卵裂率高于使用X精子（P＜0.05），在胚胎培养第9天，使用Y精子进行受精的卵细胞的囊胚发育率高于使用X精子（P＜0.05）。总之，当Hoechst 33342浓度为12μL/m L，冷冻程序为起始温度5℃；5℃～-10℃，降温时间180 s（降温速率6℃/min）;-10℃～-140℃，降温时间156 s（降温速率50℃/min）时，关中奶山羊X、Y精子进行分离及应用效果最好。
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