动物体细胞核移植技术是哺乳动物胚胎工程的主要组成部分，是实现动物克隆的有效方法[1][2]。在畜牧产业和转基因动物的生产中有着极其广阔的应用前景。然而动物体细胞的体外培养是动物克隆中非常重要的一环，但是由于哺乳动物体细胞从动物体分离后，在体外的生存期正常不会超过一年,而且还可能因为频繁传代导致遗传物质的变异,因此在常规体外培养条件下的细胞很难无限期保持原质量。如果采取适当的方法，将体外培养的细胞在超低温条件下保存,即可使细胞的生命力固定在某一阶段而不衰老死亡,对动物克隆研究具有非常重要的价值。　　本实验以延边奶山羊耳部成纤维细胞为研究对象，采用组织块加酶消化培养法进行原代培养，细胞成功扩增培养到5-6代后，用于冷冻保存实验。实验的目的是通过确定延边奶山羊耳部成纤维细胞的最佳冷冻保存程序以及冷冻保护剂，来建立一套适合延边奶山羊的冷冻体系，从而对这一优良地方奶山羊品种进行必要的保存，为以后应用体细胞核移植方法重新扩繁该品系提供重要材料。实验设计和结果如下：　　1、选择4种不同的冷冻保护程序（①4℃放30分钟、-20℃2小时、液氮口10分钟后投入液氮②4℃放30分钟、液氮口2小时后投入液氮③液氮口放20分钟后投入液氮④直接投入液氮），结果表明方法2和方法3差异不显著，方法2解冻后细胞复苏效果最好，细胞活率及培养24小时后细胞贴壁率均优于其他方法。　　2、选取5％、7.5%、10%和12.5%四个浓度的DMSO（二甲基亚砜）对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行冷冻保存，结果显示7.5%组冷冻复苏后细胞存活率达到67.3%，培养24小时后贴壁率可达到65.9%，结果均高于其他各组。　　3、选取5%、10%、15%和20%四个浓度的GC（甘油）对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行冷冻保存，结果显示15%组冷冻复苏后细胞存活率达到63.8%，培养24小时后贴壁率可达到63.3%，结果均高于其他各组。　　4、选取5%、10%、15%和20%四个浓度的EG（乙二醇），对延边奶山羊耳部成纤维细胞进行冷冻保存。结果表明，15%组冷冻复苏后细胞存活率达到　　5、61.8%，培养24小时后贴壁率可达到60.7%，结果均高于其他各组。　　6、从生长曲线可以看出，冷冻后延边奶山羊耳部成纤维细胞，传代后滞留期短，约1～2天，到达对数生长期，持续六天左右，第7天达到高峰，之后是生长抑制期出现死亡，细胞数量开始减少，进入平台期，冻存后细胞的生长规律与未进行冷冻细胞的基本一致。