苦橙花精油活性研究及其微囊的制备

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背景与目的:苦橙(Citrus Aurantium L.)是芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)常绿小乔木植物,原产自阿尔及利亚、西班牙等国家。通过蒸馏法从苦橙花花瓣中提取的苦橙花精油,主要成分为柠檬烯、芳樟醇等,可以缓解恶心、消化不良、便秘等症状,还具有镇静和抑制食欲、抗菌、抗惊厥、镇静抗炎、激发细胞活性、消除异味、软化皮肤组织、消除色素沉积、维持皮肤组织湿润等应用效果。在芳香行业应用较广泛,但关于其药理活性的基础研究较少,并且苦橙花精油具有易挥发的不稳定性,因此有必要开发可保护苦橙花精油稳定性的新剂型。本文研究了苦橙花精油化学成分并测定其体外活性,探讨苦橙花精油对小鼠急性腹膜炎的治疗作用,并将苦橙花精油制备成微囊,优化其制备工艺条件。方法:采用气相色谱-质谱法(Gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析苦橙花精油的化学成分。对苦橙花精油的抗过敏活性测定主要采用Morgan-Elson法。通过酪氨酸酶抑制率测定苦橙花精油的美白活性。通过抑菌圈法检测苦橙花精油的体外抑菌活性。使用脂多糖(LPS)作为诱导剂,对小鼠RAW264.7细胞进行诱导,从而建立炎症模型,对细胞分泌的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)采用酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测。采用相应试剂盒测定小鼠肠组织匀浆中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)的含量。用苏木精-伊红染色法(H&E)对小鼠肠组织进行染色处理并对其病理特征进行观察分析。采用蛋白电泳法检测肠组织中细胞核内NF-κB p65和IκBα的表达。对苦橙花精油微囊的包封工艺采用单因素试验法、响应面法进行优化。对苦橙花精油微囊采用扫描电子显微镜(SEM)、动态光散射(DLS)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等方法进行表征,并对其体外释药特性进行分析评估。结果:从苦橙花精油中检识到36种化学成分,醇类化合物、萜烯类化合物和酯类化合物是其主要化学成分类别。同时,苦橙花精油可以显著抑制透明质酸酶和酪氨酸酶活性,具有美白和抗过敏活性。对于大肠杆菌、无乳链球菌等五种细菌,苦橙花精油对其具有不同程度地抑制作用,还可以对LPS诱导的RAW264.7细胞产生影响,抑制了IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,说明苦橙花精油具有体外抑菌和抗炎活性。通过苦橙花精油小鼠动物实验发现,苦橙花精油可改善急性腹膜炎小鼠的肠组织损伤,降低了炎症因子IL-6和TNF-α的水平,增强了LDH活性、降低了MDA含量,可以有效抑制NF-κB信号通路的活化。苦橙花精油微囊的最佳包封条件为:壳聚糖浓度为1%,OP-10乳化剂用量为1.6%,壳核比为2:1,乳化速度为2000rpm。完成优化后,苦橙花精油微囊表面光滑,外观呈球形,连续分散光滑球形,粒径分布在2.3μm-2.6μm之间。通过对苦橙花精油的体外释放实验数据分析发现,在p H7.4环境下苦橙花精油微囊可以稳定释放72 h。结论:苦橙花精油化学成分复杂,具有美白、抗过敏、体外抑菌和抗炎活性,通过抑制NF-κB信号通路的活化降低急性腹膜炎小鼠的炎症因子水平,对急性腹膜炎具有治疗作用。采用壳聚糖制备的苦橙花精油微囊质量优良,性质稳定。研究结果为苦橙花精油的开发利用和发现腹膜炎的治疗新药提供了重要的理论依据。
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