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目的:1.运用16S rDNA测序技术检测特应性皮炎患者与健康人群肠道菌群,探讨特应性皮炎患者肠道菌群特点。2.运用中药复方培土清心方干预特应性皮炎患者,评估培土清心方对特应性皮炎患者的临床疗效及安全性,并检测分析培土清心方对特应性皮炎患者肠道菌群的影响。方法:1.临床调查:纳入符合Hanifin&Rajka诊断标准的特应性皮炎患者45例,对患者运用研究者整体评价(IGA)、特应性皮炎严重指数评分(SCORAD)、皮肤病生活质量指数(DLQI)、儿童皮肤病生活质量指数(CDLQI)等量表评估病情,并填写肠道菌群调查问卷;参照2013年特应性皮炎中医诊疗方案专家共识为AD患者进行辨证分型;纳入排除相关过敏性疾病的健康对照者39例,填写肠道菌群调查问卷;并采集特应性皮炎患者和健康对照者粪便样品。2.临床试验:采用双盲随机对照的研究方案,共纳入26例特应性皮炎患者,将患者随机分为治疗组(基础治疗+培土清心方)和对照组(基础治疗+安慰剂),每组13例,共治疗12周,观察时点为治疗第4周、8周及12周,在各时点分别记录分析患者的IGA评分、SCORAD评分、DLQI/CDLQI评分,采集各时点特应性皮炎患者粪便样品。3.肠道菌群检测分析:将采集到的全部粪便样品外送至华大基因科技有限公司武汉高通量测序实验室进行肠道菌群检测,将检测所得数据与临床资料相结合,分析特应性皮炎患者的肠道菌群特点以及培土清心方治疗对特应性皮炎患者肠道菌群产生的影响。结果:1.特应性皮炎患者与健康对照者肠道菌群比较:(1)受试者基线情况:纳入本研究的45例特应性皮炎患者和39例健康对照者均为广东省内常住居民,两组受试者在性别、年龄方面差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。(2)病情评估:纳入本研究的特应性皮炎患者病情严重程度以中度为主,IGA评分的中位数和四分位数为3(3,4)分,SCORAD评分为(46.63±13.99)分,生活质量评分为(11.79±5.22)分;中医辨证分型以心火脾虚证为主,占75.56%,其次为脾虚蕴湿证占20.0%,血虚风燥证占4.44%。(3)肠道菌群检测与分析:共采集合格粪便样品83份,分属特应性皮炎患者组(44份)和健康对照组(39份)。两组样品比较,结果显示:在Alpha多样性指数方面,两组的observed species指数、chao指数、ace指数差异均无统计学意义(P>0.05),特应性皮炎患者组的shannon指数高于健康对照组,simpson指数低于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。物种分布方面,在细菌分类的门水平,两组样品均以Bacteroidetes(拟杆菌门)占据绝对优势,其次是Firmicutes(厚壁菌门):在健康人群,拟杆菌门相对丰度为62.40%,厚壁菌门相对丰度为26.73%;在特应性皮炎患者,拟杆菌门相对丰度为59.19%,厚壁菌门相对丰度为29.49%;两菌门组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在相对丰度较低的其他菌门中,特应性皮炎患者组的Lentisphaerae(黏胶球形菌门)相对丰度高于健康对照组(P=0.023)。在细菌分类的纲水平,特应性皮炎患者组的Alphaproteobacteria(α-变形菌纲)、Deltaproteobacteria(δ-变形菌纲)相对丰度高于健康对照组(P<0.05)。在细菌分类的目水平,特应性皮炎患者组的Desulfovibrionales(脱硫弧菌目)相对丰度高于健康对照组(P<0.05)。在细菌分类的科水平,特应性皮炎患者组的Desulfovibrionaceae(脱硫弧菌科)、Porphyromonadaceae(紫单孢菌科)的相对丰度高于健康对照组(P<0.05)。在细菌分类的属水平,Bilophila(嗜胆菌属)、Coprococcus(粪球菌属)、Oscillospira(颤螺旋菌属)、Parabacteroides(副杆状菌属)相对丰度高于健康对照组(P<0.05);Faecalibacterium(柔嫩梭菌属)相对丰度高于健康对照组,但差异无统计学意义(P=0.063);重要的益生菌属如Bifidobacterium(双歧杆菌属)、Lactobacillus(乳酸菌属)、Akkermansia(艾克曼菌属)在特应性皮炎患者组和健康对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。在细菌分类的种水平,特应性皮炎患者组的Bacteroides_ovatus(卵形拟杆菌)、Bacteroides_uniformis(多形拟杆菌)、Clostridium_citroniae、Ruminococcus_torques(扭链瘤胃球菌)相对丰度均高于健康对照组(P<0.05);Prevotella_stercorea相对丰度低于健康对照组(P<0.05)。此外,特应性皮炎患者组Faecalibacterium_prausnitzii(柔嫩梭菌)的相对丰度高于健康对照组,但该差异无统计学意义(P=0.063);重要的益生菌种如Akkermansia_muciniphila在特应性皮炎患者组和健康对照组相对丰度差异均无统计学意义(P=0.922)。2.培土清心方双盲随机对照研究显示:最终纳入统计分析的特应性皮炎患者共有24例,其中治疗组13例,对照组11例。两组患者的年龄、性别、病情严重程度差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。结果显示,治疗组和对照组特应性皮炎患者的IGA评分、SCORAD评分、生活质量评分均较治疗前下降。组内比较:治疗组患者的各项评分在4周、8周、12周三个时点与0周比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组患者的IGA评分在4周、8周、12周三个时点与0周比较,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组患者的SCORAD评分在4周、12周两个时点与0周比较,差异有统计学意义(P<0.05),但在8周时点与0周比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组患者的DLQI/CDLQI评分在4周、8周、12周三个时点与0周比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。组间比较:治疗组与对照组患者的IGA评分、SCORAD评分、生活质量评分在所有时点差异均无统计学意义(P>0.05)。3.安慰剂和培土清心方治疗前后特应性皮炎患者肠道菌群比较:本研究共纳入治疗前粪便样品23份,治疗后4周时点粪便样品18份,8周时点粪便样品6份,12周时点粪便样品15份。由于8周时点粪便样品量较小,患者个体影响因素偏大,故仅比较0、4、12周三个时点的肠道菌群变化。结果显示:Alpha多样性指数方面,两组的observed species指数、chao指数、ace指数、shannon指数和simpson指数在治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在细菌分类的门水平上,两组各主要菌门相对丰度在治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但两组拟杆菌门/厚壁菌门比值变化趋势相反。在细菌分类的纲水平上,两组各主要菌纲相对丰度在治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在细菌分类的目水平上,安慰剂组各菌目相对丰度在治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05);培土清心方组Actinomycetales(放线菌目)相对丰度在12周时点与治疗前比较下降,差异有统计学意义(P<0.05);培土清心方组Campylobacterales(弯曲菌目)相对丰度在0周时与健康人群无明显差异,但在治疗第12周时下降为0,与健康人群存在差异(P<0.05)。在细菌分类的科水平上,在12周时点,安慰剂组与培土清心方组Micrococcaceae(微球菌科)的相对丰度均出现下降,与0周比较,差异均有统计学意义(P<0.05);两组其他菌科相对丰度治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在细菌分类的属水平上,安慰剂组Rothia(罗氏菌属)在12周时点相对丰度下降为0,与0周比较差异有统计学意义(P<0.05);培土清心方组Actinomyces(放线菌属)、Enterobacter(肠杆菌属)、Lactococcus(乳球菌属)、Rothia(罗氏菌属)在12周时点与0周比较,相对丰度均出现下降,差异有统计学意义(P<0.05);两组其他菌属相对丰度治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在细菌分类的种水平上,安慰剂组与培土清心方组Rothia_mucilaginosa(黏滑罗氏菌)的相对丰度在12周时点均出现下降,与0周比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组其他菌种相对丰度治疗前后不同时点比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.特应性皮炎患者肠道菌群的Alpha多样性较健康对照偏高,其肠道菌群的物种分布与健康对照基本一致,在部分菌群丰度上与健康对照存在差异:在门水平,Lentisphaerae(黏胶球形菌门)的相对丰度高于健康对照;在纲水平,Alphaproteobacteria(α-变形菌纲)、Deltaproteobacteria(δ-变形菌纲)的相对丰度高于健康对照;在目水平,Desulfovibrionales(脱硫弧菌目)的相对丰度高于健康对照;在科水平,Desulfovibrionaceae(脱硫弧菌科)、Porphyromonadaceae(紫单孢菌科)的相对丰度高于健康对照;在属水平,Bilophila(嗜胆菌属)、Oscillospira(颤螺旋菌属)、Coprococcus(粪球菌属)、Parabacteroides(副杆状菌属)的相对丰度高于健康对照;在种水平,Bacteroides_ovatus(卵形拟杆菌)、Bacteroides_uniformis(多形拟杆菌)、Clostridium_citroniae、Ruminococcus_torques(扭链瘤胃球菌)相对丰度高于健康对照;Prevotella_stercorea的相对丰度低于健康对照。2.培土清心方对特应性皮炎患者的肠道菌群有一定影响,可能会降低特应性皮炎患者肠道菌群的Alpha多样性,并调节拟杆菌门/厚壁菌门比值。