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急性A型主动脉夹层（Type A acute aortic dissection,TAAAD）发病极其凶险,并随着极高的病死率和病残率,主要病理学改变包括:细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的降解、血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）的凋亡和ECM的结构紊乱,VSMC的凋亡是目前主动脉夹层研究的热点之一。胰岛素样生长因子结合蛋白3（Insulin-like growth factor binding protein-3,IGFBP3）参与TAAAD的发病过程及相关机制目前需要进一步探究。P53导致的动脉平滑肌凋亡,我们推测IGFBP3可能通过p53促进VSMC的凋亡,直接造成平滑肌细胞的大量丢失,促进了急性A型主动脉夹层的发生和发展。摘要一.人TAAAD动脉壁组织中IGFBP3及其下游蛋白表达目的:检测人TAAAD主动脉壁组织中IGFPB3及其下游蛋白的表达。方法:收集自2019年9月至2021年1月在中国医科大学附属第一医院心脏外科临床患者,实验经某三甲医院伦理委员会批准,所有患者均签署知情同意书。其中,对照组主动脉标本12例,取自冠状动脉搭桥手术打孔的主动脉组织,所取主动脉组织相对正常,肉眼未见明确粥样硬化改变。TAAAD组为24例急性A型主动脉夹层患者的主动脉组织;收集样本后根据实验需求分别置于4%多聚甲醛或液氮中保存,使用实时定量多聚酶链反应方法（Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）测定IGFBP3的mRNA表达,测定IGFBP3、p53、Bax、Bcl-2、Caspase3蛋白表达,HE染色、Masson染色进行病理评估,免疫组化染色检测IGFBP3在主动脉组织中的表达。结果:IGFBP3在TAAAD的主动脉壁中,mRNA表达高于对照组（P＜0.05）,IGFBP3、p53、Bax、Caspase3等蛋白表达高于对照组（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达低于对照组（P＜0.05）。HE染色和Masson染色显示人主动脉夹层的血管壁结构变化明显,完整性破坏严重,红细胞渗透入中膜间隙,平滑肌细胞丢失,弹力纤维排列紊乱等改变。免疫组化显示IGFBP3分布在主动脉平滑肌中,且TAAAD组的主动脉壁中表达高于对照组（P＜0.05）。结论:IGFBP3及p53在TAAAD患者的主动脉组织中表达高于非夹层患者,提示其可能参与了主动脉夹层的发生发展。摘要二.IGFBP3通过调控p53及其下游通路在VSMC中产生促凋亡作用的研究目的:明确IGFBP3可以通过调控p53及其下游通路,在VSMC中发挥促凋亡作用。方法:使用人主动脉平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）进行培养:使用1x10^-5mol/L、5x10^-5mol/L、1x10^-6mol/L、1x10^-7mol/L及1x10^-8mol/L五种浓度的双氧水刺激VSMC,促使VSMC凋亡,检测IGFBP3的表达;转染质粒vector IGFBP3、si IGFBP3、si p53分别上调及下调IGFBP3的表达,检测其下游p53、Bax、Bcl-2的蛋白表达。使用Tunel染色检测细胞凋亡。结果:HVSMC经过双氧水处理后,表现出明显的凋亡表型,而且随着双氧水浓度增加,IGFBP3的表达也增加（P＜0.05）,双氧水在1X10^-5mol/L的浓度时,凋亡表型是最明显的,凋亡通路的相关蛋白p53（P＜0.05）,BAX增加（P＜0.05）,BCL2表达减少（P＜0.05）。双氧水处理12小时后,IGFBP3的RNA变化最显著（P＜0.05）,双氧水处理36小时后,蛋白水平变化最显著（P＜0.05）。vector IGFBP3上调,引起p53和凋亡相关蛋白的表达增加（P＜0.05）。si IGFBP3下调IGFBP3的表达,能引起p53和凋亡相关蛋白的表达减少（P＜0.05）,Tunel实验提示VSMC的凋亡在vector IGFBP3最多,si p53可以减少VSMC的凋亡（P＜0.05）。结论:IGFBP3通过上调p53及其下游通路在VSMC中产生促凋亡作用。摘要三.小鼠夹层模型的主动脉组织中IGFBP3的表达目的:建立小鼠主动脉夹层模型,并利用此模型明确IGFBP3在小鼠主动脉夹层模型中的表达情况。方法:实验使用3周龄的C57BL/6雄鼠,共分两组,对照组10只及BAPN+AngⅡ组24只,BAPN+AngⅡ组小鼠予以含有0.4%β-氨基丙腈（β-aminopropionitrile monofumarate,BAPN）的饮用水喂养28天,再皮下埋置微量泵以1000ng/（kg.min）的泵入血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,AngⅡ）,持续72小时,建立小鼠胸主动脉夹层模型。两组小鼠处死后取主动脉组织,分别置于4%多聚甲醛和液氮中,用于HE染色、Masson染色、免疫荧光染色（Immunofluorescent staining,IF）和Western Blot实验。分别检测对照组和夹层组小鼠主动脉中IGFBP3和p53蛋白表达水平,评估其病理学形态变化。结果:尸检明确观察到主动脉的破裂提示小鼠夹层造模成功,建模成功率为89.5%。HE染色及Masson染色显示,夹层组中血管壁结构破坏严重;Western Blot结果表明,相较于对照组,夹层组小鼠主动脉组织IGFBP3水平明显升高（P＜0.05）,p53及Bax表达水平增高（P＜0.05）,Bcl-2表达下降（P＜0.05）,另外免疫荧光结果表明IGFBP3与p53在主动脉平滑肌细胞中的共定位,二者存在空间上的联系。结论:BAPN联合微量泵入AngⅡ建立小鼠主动脉夹层模型,此方法简单可行,成功率高,可以为主动脉夹层的发病机制研究提供研究模型基础;IGFBP3在夹层组小鼠模型中的主动脉组织中表达显著升高,p53及其下游蛋白的表达同样升高,提示其参与了主动脉夹层的发生进程。