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DMRT/Dmrt(Doublesex and Mab3 Related Transcription factor)是一类与果蝇的性别发育调控因子Doulesex以及线虫性别发育调控因子Mab-3相关的转录因子,它们共同的特征就是具有一个类似锌指的、富含半胱氨酸、能和特异DNA序列结合的结构基序--DM保守域。目前已发现的8种D MRT/Dmrt基因,DMRT/Dmrt的大部分成员都在性腺中表达,这表明它们可能参与了性别分化或决定,此外,部分DMRT/Dmrt成员还参与胚胎发育的其他过程,如体节的发育以及神经的生成。因此Dmrt基因家族是一类非常重要的与发育相关的基因,具有重要的研究意义。我们以前的研究发现爪蟾Dmrt4在嗅觉原基和前脑中表达并在嗅觉神经的形成过程中发挥着重要作用,然而在实施基因敲落的实验中发现其效率较低,因此我们推测可能有其他的Dmrt同源基因在嗅觉神经形成的过程中存在着功能冗余。本研究通过对热带爪蟾Dmrt5的克隆以及其在胚胎发育过程中的时空表达和功能分析,来探讨Dmrt5是否存在与Dmrt4类似的参与嗅觉神经形成的重要功能。主要的研究结果如下:
1.运用RT-PCR从热带爪蟾(X.tropicalis)胚胎中克隆得到Dmrt5全长cDNA,构建系统进化树,从而确认所得到的克隆是Dmrt5基因。
2.通过RT-PCR和整体原位杂交方法表明Dmrt5可能是一种母系因子(maternalfactor),从胚胎的神经胚早期开始,Dmrt5主要在神经板头部边缘特异表达,到神经胚晚期,Dmrt5的表达则主要集中在形成中的嗅觉原基和端脑背部以及中脑腹部。
3.Dmrt5受到fgf,RA,writ这些尾部化因子的抑制,符合神经形成诱导的假说.
4.通过功能丧失性实验(显性抑制突变体和morpholino),发现Dmrt5基因敲落可以抑制神经分子标记信号因子Neurogenin和嗅觉的神经元分化因子Xebf2的表达.
5.在基因敲落的试验中,我们中还发现Dmrt5的基因敲落可以抑制Dmrt4的表达。从以上研究结果我们推测热带爪蟾Dmrt5能够与Dmrt4一样调控嗅觉神经形成下游基因Neurogenin和Xebf2的表达,因而在嗅觉神经形成过程中起着重要的调节作用,并且这种调控可能是通过对Dmrt4的表达的调控来实现的.