【摘 要】
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抗生素在畜牧业、兽医和临床治疗领域的广泛使用导致大量耐药菌株出现,耐药菌又直接或间接将其携带的耐药基因和耐药性传播给人类。目前,细菌的耐药性已成为全球性公共卫生和食品安全的主要问题之一。细菌表达抗生素钝化酶是其耐药性形成的主要机制之一,超广谱β-内酰胺酶（Extended spectrumβ-lactamases,ESBLs）是肠杆菌科细菌在应对广谱β-内酰胺类抗生素,尤其是第三代头孢菌素选择性压
【基金项目】
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国家自然科学基金项目“基于ESBLs的食源性沙门氏菌耐药性传播和产生机制”（编号:31671956）；
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抗生素在畜牧业、兽医和临床治疗领域的广泛使用导致大量耐药菌株出现,耐药菌又直接或间接将其携带的耐药基因和耐药性传播给人类。目前,细菌的耐药性已成为全球性公共卫生和食品安全的主要问题之一。细菌表达抗生素钝化酶是其耐药性形成的主要机制之一,超广谱β-内酰胺酶（Extended spectrumβ-lactamases,ESBLs）是肠杆菌科细菌在应对广谱β-内酰胺类抗生素,尤其是第三代头孢菌素选择性压力而产生的一种β-内酰胺酶,具有广泛的酶活性。本研究以不同来源（不同医院不同时间诊疗的不同患者源、患者所在社区采集食品源和环境源）的肠炎血清型沙门氏菌为研究对象,进行了具ESBLs表型菌株筛选、菌株药敏性测定及ESBLs基因亚型的确定;同时,对得到的产CTX-M-55型ESBLs沙门氏菌进行了基于脉冲场凝胶电泳的基因分型研究,并以此为基础探索了产ESBLs肠杆菌blaCTX-M-55基因的水平转移情况,初步阐明肠杆菌质粒介导的CTX-M-55型ESBLs耐药性传播机制。获得结果如下:（1）采用双纸片协同法筛选得到242（78.83%）株具ESBLs表型的沙门氏菌。参考临床实验室标准化委员会（the Clinical Laboratory Standard Institute,CLSI）推荐的纸片扩散法对沙门氏菌的药敏性测定结果表明,242株肠炎沙门氏菌对头孢噻肟的耐药率最高（100%）,对其它抗生素的耐药情况依次分别为氨苄西林（91.74%）、头孢哌酮（91.32%）、萘啶酮酸（91.32%）、头孢他啶（82.64%）、链霉素（51.24%）、磺胺异噁唑（45.45%）、四环素（44.21%）、氯霉素（30.58%）、复方新诺明（19.83%）、庆大霉素（12.81%）、甲氧苄氨嘧啶（12.81%）、阿莫西林/克拉维酸（4.55%）、环丙沙星（1.24%）和氧氟沙星（1.24%）。（2）采用PCR扩增和DNA序列测定方法,筛查了ESBLs产生菌携带的ESBLs编码基因(主要包括:blaTEM、blaCMY、blaCTX-M、blaOXA、blaPSE、blaPER、blaIMP、bla VIM、bla ACC和bla GES等)。242株具ESBLs表型沙门氏菌中,159（65.70%）株携带blaCTX-M-55基因,为菌株携带的最主要基因类型。blaTEM-1、blaCTX-M-64和blaCTX-M-123基因分别在62（25.62%）株、4（1.65%）株和4（1.65%）株菌株中检出。（3）使用限制性内切酶XbaⅠ对159株产CTX-M-55型ESBLs的沙门氏菌进行酶切,PFGE分型后共得到64种基因型。按照98.89%的相似性,74株菌的基因型表现出较近的亲缘关系。部分鸡肉源菌株与临床源菌株或分离自不同时间、地区和患者的临床源菌株的指纹图谱相似度可达到100%,基因型具有极高的一致性。由此表明,鸡肉有可能是导致食源性沙门氏菌病爆发的主要食品来源,这些于不同时间分离于不同医院不同患者的沙门氏菌在进化上可能为具有较高基因同源性的沙门氏菌克隆演变而来。（4）依据菌株的背景信息,挑选出8株携带blaCTX-M-55基因的代表性肠杆菌作为供体菌（包括6株沙门氏菌和2株大肠杆菌）,与3株受体菌株（包括1株沙门氏菌、1株大肠杆菌和工程菌株EC600）进行体外接合实验。不同供体菌均可成功地将其bla CTX-M-55基因及其抗生素抗性表型转移至受体菌株,耐药基因和耐药表型的转移不受供、受体菌株种属间差异的影响。通过S1-PFGE及Southern Blot杂交对耐药基因在接合子所在质粒进行定位和大小确定结果显示,不同供、受体菌接合所得的接合子均携带1-3个具有blaCTX-M-55基因的质粒,质粒大小约为70 kb至335 kb,该耐药基因主要位于大小～80 kb的质粒上。
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