【摘 要】
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研究目的:观察大鼠心肺复苏后,脑肠肽（ghrelin）对脑缺血再灌注神经元焦亡的作用,并初步探讨其机制。研究方法:建立心脏骤停模型,采用电刺激心外膜法。选择雄性SD大鼠72只,体重200-300g,随机分为3组:（1）Sham组（假手术组）:仅进行备皮麻醉、经股动、静脉置管和经口腔气管插管等操作;（2）Control组（CPR+生理盐水）:诱导大鼠心脏骤停,电刺激心外膜,缺血时间达6分钟,6分钟后
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研究目的:观察大鼠心肺复苏后,脑肠肽（ghrelin）对脑缺血再灌注神经元焦亡的作用,并初步探讨其机制。研究方法:建立心脏骤停模型,采用电刺激心外膜法。选择雄性SD大鼠72只,体重200-300g,随机分为3组:（1）Sham组（假手术组）:仅进行备皮麻醉、经股动、静脉置管和经口腔气管插管等操作;（2）Control组（CPR+生理盐水）:诱导大鼠心脏骤停,电刺激心外膜,缺血时间达6分钟,6分钟后对心肺复苏成功的大鼠给予0.9%生理盐水等量（同ghrelin组）的静脉注射;（3）Ghrelin组（CPR+ghrelin组）:电刺激大鼠心外膜诱导心脏骤停,并持续6分钟,复苏成功后,立即给予大鼠80 ug/kg的ghrelin静脉注射。自主循环恢复（ROSC）后放回鼠笼观察,进一步进行以下实验:（1）行为学分析:假手术或缺血再灌注后1天、2天、3天,对大鼠进行胶带移除实验[1],进行神经功能评分,评估神经功能损伤情况;（2）分析各组大鼠脑水肿的情况;（3）自主循环恢复后1天、3天,取脑组织切片行TUNEL染色[2],观察大鼠海马组织CA1区神经元凋亡情况,并计数阳性细胞个数,计算凋亡指数;（4）取脑组织进行免疫组化实验,比较三组大鼠焦亡相关蛋白及其剪切片段的表达情况;（5）取脑组织进行Western blot技术,比较三组大鼠焦亡相关因子的表达情况;（6）自主循环恢复后3天,取脑组织行透射电镜检查,观察三组大鼠脑神经元及线粒体超微结构改变。研究结果:（1）与sham组相比,ROSC后1天组,control组与ghrelin组神经功能评分较sham组明显提高（P<0.05）,control组与ghrelin组无明显差异（P>0.05）,而ROSC后2天和3天,ghrelin组神经功能评分较control组显著降低（P<0.05）;（2）与sham组相比,control组脑水肿程度明显增加（P<0.05）,ghrelin组脑水肿较control组明显减轻（P<0.05）;（3）Tunel法表明:与sham组相比,control组CA1区凋亡细胞明显增多（P<0.01）,与control组相比,ghrelin组脑CA1区神经元凋亡明显减少（P<0.01）;（4）免疫组化法表明:与sham组相比,control组及ghrelin组NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β表达升高（P<0.05）,而与control组相比,ghrelin组的大鼠焦亡相关因子表达量降低（P<0.05）;（5）Western blot法表明:与sham组相比,control组及ghrelin组NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β表达明显升高（P<0.05）,而与control组相比,ghrelin组的大鼠焦亡相关因子表达量较低（P<0.05）;（6）透射电镜提示:与sham组相比,control组及ghrelin组可见神经元线粒体嵴消失、肿胀、空泡化,而与control组相比,ghrelin组的损害减轻。结论:（1）细胞焦亡是缺血再灌注神经元迟发性损伤阶段死亡的重要方式。（2）Ghrelin能显著减少缺血再灌注诱导的神经元焦亡;（3）Ghrelin的抗焦亡作用可能与抑制外周促炎细胞因子的表达与释放,改善线粒体损害,改善再灌注脑损伤造成的认知功能障碍有关。
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