【摘 要】
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为构建弧菌铁蛋白受体pvuA重组质粒，提高其在大肠杆菌BL21中的表达产量，优化表达条件，并为其免疫原性研究奠定基础，从副溶血弧菌基因组DNA扩增了弧菌铁蛋白受体pvuA基因，构建了重组质粒pET-28a（+）-ferric vibrioferrin receptor，转入大肠杆菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG）诱导表达蛋白。在
【机 构】
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为构建弧菌铁蛋白受体pvuA重组质粒，提高其在大肠杆菌BL21中的表达产量，优化表达条件，并为其免疫原性研究奠定基础，从副溶血弧菌基因组DNA扩增了弧菌铁蛋白受体pvuA基因，构建了重组质粒pET-28a（+）-ferric vibrioferrin receptor，转入大肠杆菌BL21并经异丙基硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG）诱导表达蛋白。在单因素试验的基础上，以菌体初始浓度、诱导时间、诱导温度、诱导剂浓度为自变量，菌体蛋白浓度为响应值，根据响应面法的Box-Benhnken中心设计原理，研究自变量及其交互作用对弧菌铁蛋白产量的影响，利用Design-Expert和响应面分析相结合的方法对诱导条件进行优化。IPTG诱导获得的重组蛋白以包涵体的形式存在，优化后最终确定重组弧菌铁蛋白受体pvuA最佳表达条件为菌体初始浓度OD600=0.6，诱导时间10 h，诱导温度37℃，IPTG浓度为1.0 mmol·L-1，此时包涵体沉淀中蛋白含量最高，为11.00 mg·mL-1。构建了弧菌铁蛋白受体pvuA的大肠杆菌重组表达质粒，通过优化表达条件提高了纯化蛋白产率，为研究弧菌铁蛋白受体蛋白的多克隆抗体的制备和应用奠定了基础。
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