【摘 要】
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[目的]为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因.[方法]基于山麦冬转录数据,通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因.以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定候选内参基因的表达,采用ΔCt值法、geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件包分析候选基因的表达稳定性,最后选取来自6个基因家族(C4H、CHS、MT、UFGT、MYB和bHLH)的10个目的基因(C4H、CHS-1、CHS-2、M
【机 构】
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浙江农林大学 风景园林与建筑学院,浙江 杭州 311300
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[目的]为山麦冬Liriope spicata果实花青素生物合成研究筛选最佳内参基因.[方法]基于山麦冬转录数据,通过变异系数以及变化倍数初步筛选出山麦冬15个候选内参基因.以幼果期和成熟期山麦冬果实为材料,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术测定候选内参基因的表达,采用ΔCt值法、geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件包分析候选基因的表达稳定性,最后选取来自6个基因家族(C4H、CHS、MT、UFGT、MYB和bHLH)的10个目的基因(C4H、CHS-1、CHS-2、MT、UFGT-1、UFGT-2、MYB-1、MYB-2、MYB-3、bHLH),对所选内参基因组合进行验证.[结果]4种方法分析得出的候选内参排序存在一定差异,需综合4种方法的几何平均值作为综合排序.根据geNorm软件推荐的最适内参数目为4个,即CNNM、GPR107、EF1-α、G6PD-2最稳定,PDP最不稳定.对10个目的基因表达量标准化验证发现:以CNNM、GPR107为内参组合与选用4个基因作为内参组合无显著差异,相关系数可达0.9999,且选用双内参组合比4个内参组合的可操作性强,而不适合的内参基因(PDP)会对RT-qPCR结果产生严重偏差.[结论]以CNNM、GPR107作为组合是山麦冬果实花青素生物合成研究的最佳内参基因.
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