【摘 要】
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目的建立基于实时定量PCR检测细胞色素P450 2C9（CYP2C9）1075A>C、维生素K环氧化物还原酶(VKOR)C1-1639 G>A的方法；初步探讨CYP2C9 1075A>C和VKORC1-1639 G>A在北京汉族人中的分布状况；并评价CYP2C9和VKORC1多态性与华法林用量个体间差异的相关性，为临床合理应用华法林提供理论依据。方法用等位基因特异性（ARMS）-PCR结合荧光定量
【机 构】
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100044北京大学人民医院检验科,100044北京大学人民医院检验科
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目的建立基于实时定量PCR检测细胞色素P450 2C9（CYP2C9）1075A>C、维生素K环氧化物还原酶(VKOR)C1-1639 G>A的方法；初步探讨CYP2C9 1075A>C和VKORC1-1639 G>A在北京汉族人中的分布状况；并评价CYP2C9和VKORC1多态性与华法林用量个体间差异的相关性，为临床合理应用华法林提供理论依据。
方法用等位基因特异性（ARMS）-PCR结合荧光定量PCR技术（TaqMan Prob），建立ARMS-TaqMan PCR检测CYP2C9 1075A>C和VKORC1-1639 G>A点突变方法，并评价其灵敏度、重复性和与直接测序法的符合率。同时，用自建ARMS-TaqMan PCR法检测2011年5月至9月于北京大学人民医院因房颤、血栓栓塞以及心脏手术就诊的145例需长期口服华法林北京汉族患者CYP2C9 1075A>C和VKORC1-1639 G>A点突变基因型，并分别分析患者性别、年龄、体表面积（BSA）与华法林稳定剂量的相关性，以及突变位点与华法林用药剂量的关系。
结果用自建ARMS-TaqMan PCR法检测CYP2C9 1075A>C和VKORC1-1639 G>A点突变的最低DNA检测量为105拷贝/ml，批内及批间变异系数（CV）值分别＜5.5%和9.0%，自建ARMS-TaqMan PCR法与直接测序法平行检测50例患者标本的符合率100%。在145例患者中CYP2C9 1075 AA、AC、CC基因型频率分别为93.8%（136/145）、6.2%（9/145）、0（0/145），VKORC1-1639 GG、GA、AA基因型频率分别为0.7%（1/145）、21.4%（31/145）、77.9%（113/145），分布符合Hardy-Weinberg平衡；以国际标准化比值（INR）2.0~3.0为靶剂量，145例长期口服华法林的CYP2C9 1075 AA基因型患者华法林用量明显高于AC基因型（F=0.199，P<0.05），VKORC1-1639 GA基因型患者华法林用量明显高于AA基因型（F=1.745，P<0.001）。经单因素回归分析，年龄、BSA、CYP2C9 1075和VKORC1-1639基因型可分别解释华法林稳定剂量个体差异11.9%、12.9%、4.4%、16.7%的原因。采用多元逐步回归得出华法林稳定剂量方程，可解释华法林稳定剂量个体差异40.4%的原因。
结论自建ARMS-TaqMan PCR定性检测CYP2C9 1075A>C和VKORC1-1639 G>A基因点突变法灵敏、准确，可满足临床需求。基于年龄、BSA、CYP2C9 1075和VKORC1基因型的回归方程可提高华法林剂量调整效率，并可为临床合理应用华法林提供参考。（中华检验医学杂志，2012,35：1010-1015）
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