【摘 要】
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目的 检测长链非编码RNA缺氧诱导因子-1alpha-反义链1(lncRNA HIF-1α-AS1)在缺糖缺氧血管内皮细胞中的表达及对细胞缺氧应激损伤的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞并建立缺糖缺氧模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)方法从95种长链非编码RNA中筛选出缺糖缺氧后表达差异显著的基因lncRNA HIF-1α-AS1.用流式细胞仪、TUNEL/Hochest检测细胞凋亡情况.siRNA干扰lncRNA HIF1α-AS1表达后,通过乳酸脱氢酶漏出率、West
【机 构】
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310007 杭州,空军杭州特勤疗养中心疗养一区药械科;311300 杭州,浙江农林大学动物科技学院动物医学院
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目的 检测长链非编码RNA缺氧诱导因子-1alpha-反义链1(lncRNA HIF-1α-AS1)在缺糖缺氧血管内皮细胞中的表达及对细胞缺氧应激损伤的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞并建立缺糖缺氧模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)方法从95种长链非编码RNA中筛选出缺糖缺氧后表达差异显著的基因lncRNA HIF-1α-AS1.用流式细胞仪、TUNEL/Hochest检测细胞凋亡情况.siRNA干扰lncRNA HIF1α-AS1表达后,通过乳酸脱氢酶漏出率、Western blot检测超氧化物歧化酶1(SOD1)表达等方法评估细胞损伤情况.结果 血管内皮细胞建立缺糖缺氧模型后,lncRNA HIF-1α-AS1含量显著上升1.98倍(P<0.05).对lncRNA HIF-1α-AS1进行干扰后,3个干扰组细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率与模型组相比显著下降,siRNA1组为20.84％±2.64％(P<0.05),siRNA2组为19.82％±1.61％(P<0.01),siRNA3组为17.01％±0.24％(P<0.01).siRNA2和siRNA3的SOD1基因mRNA水平显著上调(P<0.01);2组SOD1蛋白表达量也明显上升,siRNA2(P<0.05),siRNA3(P<0.01),细胞损伤减轻.结论 干扰lncRNA HIF-1α-AS1的表达能够减轻血管内皮细胞缺糖缺氧后的损伤,提高细胞的抗缺氧能力,这可能与SOD1表达量升高、乳酸脱氢酶漏出减少有关.
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