通过胰腺原位灌注实验结合钙通道阻断剂的应用探讨L型和P/Q型钙通道在调控大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌中的作用。
方法健康雄性SD大鼠24只,采用随机数字表法分为对照组(n=8)、L型通道阻断组(n=8)和P/Q型通道阻断组(n=8)。用戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔注射麻醉,沿腹正中线做一切口,将胰腺与脾、胃、结肠等组织器官分离,分别在腹主动脉和门静脉上适当的位置插入硅胶导管。各组大鼠均先用37 ℃改良三羧酸循环4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液(modified Krebs-Ringer HEPES)通过腹主动脉插管以1 ml/min流速预灌注40 min,随后开始正式灌注实验并收集门静脉插管的流出液。对照组先用含3.3 mmol/L葡萄糖的Modified Krebs-Ringer HEPES低糖缓冲液对完整的大鼠胰腺灌注10 min,再用含16.7 mmol/L葡萄糖的Modified Krebs-Ringer HEPES高糖缓冲液灌注25 min;L型通道阻断组先用低糖灌注液灌注10 min,再用50 nmol/L依拉地平-高糖灌注液灌注25 min;P/Q型通道阻断组用低糖灌注液灌注10 min,再用10 nmol/L漏斗网蛛毒素-高糖灌注液灌注25 min。各组均从门静脉收集每分钟的流出液,用放射免疫分析法检测其胰岛素水平。以第1~10分钟为低糖灌注液灌注期,第11~15分钟为第1时相,第16~35分钟为第2时相,计算胰岛素分泌率。多组数据比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。
结果对照组、L型通道阻断组和P/Q型通道阻断组大鼠的体重、空腹血糖值比较差异均无统计学意义(F值分别为1.224、0.377,均P>0.05)。大鼠基础胰岛素分泌率各组间比较差异均无统计学意义(F=0.095,P>0.05)。高糖刺激下,L型通道阻断组的胰岛素1相和2相分泌率及分泌峰值均显著低于对照组和P/Q型通道阻断组[分别为(402±24)、(744±32)、(728±42)μU/min,F=163.879,P<0.01;(323±29)、(568±40)、(563±19)μU/min,F=95.043,P<0.01;(521±43)、(1134±146)、(1083±199)μU/min,F=27.713,P<0.01];P/Q型通道阻断组的胰岛素1相和2相分泌率及分泌峰值与对照组比较差异均无统计学意义(t值分别为163.879、95.043、27.713,均P>0.05)。
结论阻断L型钙通道能显著抑制高糖刺激的大鼠胰岛β细胞胰岛素双相分泌,阻断P/Q型钙通道对大鼠胰岛β细胞胰岛素的分泌未见显著影响,表明正常大鼠胰岛β细胞L型钙通道在调控胰岛素双相分泌中起主要作用,而P/Q型钙通道对胰岛素双相分泌的调控并无显著作用。