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目的
评价脊髓背角神经元微小RNA9(miR-9)在糖尿病神经痛大鼠钙稳态调节蛋白1(CALHM1)过表达中的作用。
方法健康雄性SD大鼠93只，2月龄，体重180～200 g，采用腹腔注射1%链尿佐菌素(STZ)60 mg/kg的方法制备大鼠糖尿病模型。实验Ⅰ 采用随机数字表法分为2组：正常对照组(C组，n＝10)和糖尿病神经痛组(DNP组，n＝83)。分别于STZ注射前、注射后1、2、3、4、5、6周时测定机械缩足反应阈(MWT)；于STZ注射后6周时采用原位杂交法测定脊髓背角miR-9表达。实验Ⅱ STZ注射后6周时取糖尿病神经痛大鼠，分离、培养脊髓背角神经元，以5×106个/ml的密度接种于培养孔(2 ml/孔)，采用随机数字表法分为2组(n＝18)：对照组(C组)和miR-9反义寡核苷酸组(ASO组)。ASO组加入miR-9反义寡核苷酸的单链核苷酸序列：5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′，终浓度为100 pmol/L。于孵育48 h时采用qRT-PCR法测定miR-9和CALHM1 mRNA的表达，于孵育72 h时采用Western blot法测定CALHM1的表达。
结果实验Ⅰ 与C组比较，DNP组STZ注射后2～6周时MWT降低，脊髓背角miR-9表达上调(P<0.05)。实验Ⅱ 与C组比较，ASO组脊髓背角神经元miR-9、CALHM1及其mRNA表达下调(P<0.05)。
结论脊髓背角神经元miR-9可能介导了糖尿病神经痛大鼠CALHM1的过表达。