绞股蓝皂苷LI与顺铂联用对食管癌EC109细胞生长的抑制作用

来源 :中国药理学与毒理学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zsjingling
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目的 研究绞股蓝皂苷LI(Gyp LI)与顺铂(DDP)联用对食管癌EC109细胞存活的抑制作用,以及对细胞凋亡、周期和迁移的影响。方法 (1)将Gyp LI 0~200μmol·L-1、DDP 0~800μmol·L-1、Gyp LI3.125μmol·L-1+DDP 0~200μmol·L-1分别作用EC109细胞24 h,MTT法检测细胞存活率并计算半抑制浓度(IC50)值,利用CompuSyn软件计算联合指数(CI)。(2)将EC109细胞分为细胞对照组、Gyp LI60μmol·L-1组、DDP 35μmol·L-1组及Gyp LI 3.125μmol·L-1和DDP 10μmol·L-1联用组,给药24 h后,显微镜下观察细胞形态,Annexin V-FITC/PI双染、PI/RNase染色和流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,采用划痕实验检测细胞迁移,Western印迹法检测促凋亡因子Bax、细胞色素c、细胞周期蛋白A、细胞周期蛋白D1和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达。结果 (1) Gyp LI和DDP单用组EC109细胞存活率的IC50值分别为(55.34±3.52)μmol·L-1和(37.48±2.99)μmol·L-1,Gyp LI 3.125μmol·L-1与不同浓度DDP联用时,IC50值降至(8.05±5.34)μmol·L-1,CI值均<1,表明两药联用具有协同作用。(2) Gyp LI与DDP联用时细胞出现生长缓慢、形态不规则、细胞脱落等特征。与细胞对照组比较,Gyp LI 60μmol·L-1组、DDP35μmol·L-1组和联用组的细胞凋亡率从(1.30±0.08)%分别上升至(4.87±0.04)%,(6.44±0.37)%和(9.12±0.20)%(P?0.01),联用组细胞凋亡率比DDP单用组显著升高(P<0.01)。Gyp LI组、DDP组和联用组细胞周期分别阻滞于S期,G2/M期和G0/G1期。与细胞对照组比较,Gyp LI 60μmol·L-1组、DDP 35μmol·L-1组和联用组细胞迁移率从(29.54±5.56)%分别降至(15.30±3.64)%,(13.61±0.06)%和(5.95±0.56)%(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与细胞对照组相比,DDP 35μmol·L-1组和联用组促凋亡因子Bax表达水平均显著升高(P<0.01),Gyp LI 60μmol·L-1组、DDP 35μmol·L-1组和联用组细胞色素c表达水平均显著升高(P<0.01),其中联用组Bax和细胞色素c相对表达含量最高;与细胞对照组相比,Gyp LI 60μmol·L-1组细胞周期蛋白A表达水平显著降低(P<0.01),联用组细胞周期蛋白D1表达水平显著降低(P<0.05);与细胞对照组相比,Gyp LI 60μmol·L-1组、DDP 35μmol·L-1组和联用组MMP-9表达均下降(P<0.05,P<0.01),其中联用组MMP-9表达水平最低。结论 Gyp LI具有较好的抑制EC109细胞存活作用,与DDP联用能够协同抑制EC109细胞增殖,联用机制可能与上调Bax和细胞色素c表达、下调细胞周期蛋白D1和MMP-9表达有关。
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