红花注射液中蛋白类成分的分离、纯化与细胞致敏性评价

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目的 对红花注射液中蛋白类成分进行分离、纯化和致敏性研究。方法 采用DEAE-52阴离子交换树脂对红花注射液中蛋白成分进行洗脱,初步探究洗脱成分的致敏性。然后采用SephadexG-100大孔树脂对含有潜在致敏蛋白成分的洗脱液进行分离纯化,获取潜在致敏纯化蛋白。最后采用RBL-2H3细胞脱颗粒试验,进行潜在致敏蛋白的致敏性验证。结果 DEAE-52阴离子交换树脂洗脱后,免疫印迹法检测到0.04mol/L、0.05mol/LNaCl-TBS洗脱液中均含有潜在致敏蛋白成分。SephadexG-100大孔树脂洗“,”Objective The isolation, purification and sensitization of proteins in safflower injection were studied. Methods The DEAE-52 anion exchange resin and Sephadex G-100 macroporous resin was used to isolate and purify the potential allergenic proteins in safflower injection. Western blot was used to localize the potential allergenic proteins. Finally, RBL-2H3 cell degranulation test was used to verify the allergenicity of the purified proteins. Results After elution with DEAE-52 anion exchange resin, potential sensitizing proteins were detected in 0.04 and 0.05mol/l NaCl TBS eluent by Western blot. After elution with Sephadex G-100 macroporous resin, Tricine-SDS-PAGE gel analysis and Western Blot immunoblot analysis confirmed that elution peak B was the target allergen protein component with a molecular weight between 35-48 kD. The release rate of β - hexosidase from RBL-2H3 cells was significantly increased by the allergen protein. Conclusion There is a sensitizing protein in safflower injection, and its molecular weight is between 35-48 KD.
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