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目的:本研究旨在探索IL-35是否减轻LPS所导致心脏损伤,并阐明其可能的分子机制。方法:1、获取SPF级的C57BL/6小鼠共24只,室温条件下普通饲料喂养,将小鼠按随机分配原则分为三组:(1)Control组(n=8):Control组先经尾静脉将2ml的PBS注射入小鼠体内作预处理,7天后再经腹腔注射PBS,放置12小时;(2)LPS组(n=8):LPS组先经尾静脉将2ml的PBS注射入小鼠体内作预处理,7天后再经腹腔注射LPS(10mg/kg),放置12小时;(3)LPS+IL-35组(n=8):LPS+IL-35组先经尾静脉将2ml含100ug pIL-35的PBS注射入小鼠体内作预处理,7天后经腹腔注射LPS(10mg/kg),同样放置12小时。所用的质粒转移技术为大容量快速经尾静脉质粒注射技术,即将含有100μg质粒DNA pIL-35的2ml PBS溶液经尾静脉在5-10秒内注射入小鼠体内。7天后再经LPS处理小鼠12小时后,用超声检测小鼠心功能,再处死小鼠,取组织用于其他检测;用全自动生化分析仪检测血清中心肌损伤标志物(LDH,CK-MB);ELISA检测血清炎症因子变化;取心脏切片做HE、Masson染色;RT-PCR,Western blot检测其他项目。2、取小鼠心肌成纤维细胞(CFs),接种于6孔板,密度为1×10~6个细胞,加入培养基DMEM,加入10%胎牛血清(FBS)和1%青霉素/链霉素(Hyclone),置于37℃、5%CO2的湿化培养箱中。当细胞应生长到培养皿的90%左右时,CFs先用低(1ng/ml)、中(10ng/ml)、高(50ng/ml)浓度的IL-35预处理1小时,再用LPS(100ng/ml)处理24小时。将培养的CFs随机分为5组:(1)Control组:不添加IL-35或LPS;(2)LPS组:只添加LPS(100ng/mL);(3)低剂量IL-35预处理+LPS组:LPS+IL-35(1ng/ml),加入IL-35(1ng/ml)和LPS(100ng/ml);(4)中剂量IL35预处理+LPS组:LPS+IL-35(10ng/ml),加入IL-35(10ng/ml)和LPS(100ng/ml);(5)高剂量IL35预处理+LPS组:LPS+IL-35(50ng/ml),加入IL-35(50ng/ml)和LPS(100ng/ml)。获取所需细胞用于实验检测,如CCK8,RT-PCR,Western blot等实验。结果:1、Western blot实验检测结果显示,与Control组小鼠相比,LPS组小鼠的心脏IL-35表达水平下降;而与LPS组小鼠相比,LPS+IL-35组小鼠以质粒DNA(pIL-35)预处理后其心脏IL-35表达水平显著升高。2、小鼠心脏超声检测结果显示,与Control组小鼠相比,LPS组小鼠的心功能明显降低;而与LPS组小鼠相比,LPS+IL-35组小鼠以质粒DNA(pIL-35)预处理后显著减轻LPS引起的心脏功能障碍。3、HE染色、Western blot和RT-qPCR实验检测结果显示,与Control组小鼠相比,LPS组小鼠的心脏炎症因子表达明显升高;而与LPS组小鼠相比,LPS+IL-35组小鼠以质粒DNA(pIL-35)预处理后显著减轻LPS引起的心脏炎症反应。4、Western blot实验检测结果显示,与Control组小鼠相比,LPS组小鼠心脏细胞凋亡水平明显增加;而与LPS组小鼠相比,LPS+IL-35组小鼠以质粒DNA(pIL-35)预处理后显著减轻LPS引起的心脏细胞凋亡。5、Massion染色、Western blot和RT-qPCR实验检测结果显示,与Control组小鼠相比,LPS组小鼠的心脏纤维化水平明显升高;而与LPS组小鼠相比,LPS+IL-35组小鼠以质粒DNA(pIL-35)预处理后显著减轻LPS引起的心脏纤维化水平。6、CCK-8实验检测结果显示,不同浓度IL-35预处理CFs细胞能减轻LPS诱导的CFs细胞活性降低,并呈浓度依赖性。7、Western blot和RT-qPCR实验检测结果显示,与Control组CFs细胞相比,LPS组CFs细胞的炎症和纤维化水平明显升高;而与LPS组CFs细胞相比,不同浓度IL-35预处理CFs细胞显著降低LPS诱导的CFs细胞的炎症和纤维化水平,并呈浓度依赖性。结论:1、IL-35可以减轻LPS引起的心功能损伤。2、IL-35降低LPS诱导的心脏炎症水平,其主要通过抑制NF-κB信号通路活性抑制炎症反应。3、IL-35能抑制LPS所致的心肌细胞凋亡。4、IL-35可降低LPS引起的心肌纤维化,其主要是通过抑制TGF-β1/Smad2/3信号通路活性抑制心脏纤维化。