调节性T(Treg)细胞对维持自身免疫稳态至关重要，也是肿瘤抑制性微环境形成的重要原因。为了具有更好的抑制活性，Treg细胞也要经历类似T细胞一样的活化过程，最终分化为表达Blimp1的效应性Treg细胞，可分泌可溶性抑制性细胞因子，行使区域免疫抑制功能。TGF-β、IL-10是被普遍研究的免疫抑制因子，而最近研究发现了一种新的抑制型细胞因子——IL-35，该因子已被证实在体内和体外都具有很强的免疫抑制能力，它不仅具有直接抑制效应T细胞反应的能力，而且还能够在感染性疾病和肿瘤中引起传染性免疫耐受，诱导常规T(Tconv)细胞表达IL-35成为诱导性T细胞（iTr35）。但是，因受限于没有合适的抗体，目前检测分泌IL-35的细胞仍存在困难，已知的研究都是建立在利用RT-PCR和ELISA技术在细胞总体水平上的检测，缺乏对产生IL-35的细胞深入细致的了解。　　本课题利用BAC转基因技术构建了IL-35的报告基因小鼠(Ebi3-Dre-Thy1.1小鼠，简称35EbiT)，在该小鼠中可以用细胞表面Thy1.1的表达来指示细胞内Ebi3亦即IL-35的分泌情况，并可以通过注射Thy1.1抗体在体内研究IL-35产生细胞的功能。通过报告基因的标记，我们发现，在小鼠体内存在的IL-35分泌细胞主要来源于tTreg细胞;IL-35-Treg表现出效应性Treg细胞的表型，并且在控制肿瘤免疫和肠道免疫反应中发挥重要功能;Foxp3可以促进Treg细胞分泌更多的IL-35细胞因子并且这个过程不依赖Blimp1的表达。进一步通过表面分子和转录谱分析发现，分泌IL-35的IL-35-Treg和分泌IL-10的Blimp1+Treg是两群相对独立的效应性Treg亚群，它们具有不同的表面标记和组织分布。其中，IL-35-Treg细胞高表达CCR7、Vcam1等分子，倾向于留在T细胞区域，可能抑制早期的T细胞活化;而Blimp1+Treg细胞分泌高水平IL-10和多种颗粒酶(Gzms)，高表达多种趋化因子受体，倾向于迁移到外周免疫部位发生抑制功能;如果同时敲除这两种细胞小鼠则会罹患自发肠炎。　　本课题利用报告基因小鼠作为研究工具，打破了无法对分泌IL-35的细胞进行分析分选的技术瓶颈。并且从表型和功能两方面阐述了IL-35-Treg细胞的基本特点，初步揭示了IL-35-Treg细胞的分化发育规律及其功能发挥。该研究将丰富我们对Treg免疫抑制机制的认识，可能为多种自身免疫疾病、感染性疾病及癌症等提供新的治疗策略。