神经干细胞(neural stem cells, NSCs)的发现是在研究造血发生和神经发育的基础上开始的。研究结果显示，胚胎和成人脑组织中均存在NSCs。它强大的增殖能力使得NSCs易于在体外大量繁殖，在体内移植时常常具有低免疫原性，因此在临床治疗中具有广阔的应用前景。本文选择的实验材料为新生SD (sprague-dawley)大鼠，首先探讨了NSCs的体外分离、培养及鉴定的方法。无菌条件下分离出大鼠的海马组织，采用无血清培养法进行培养。研究结果表明，以5×10~5个/mL的细胞密度接种到培养瓶中，传代后的细胞生长稳定，经免疫荧光鉴定均为Nestin阳性。建立了一种快速获得NSCs的体外培养及鉴定系统。在此基础上，以DMEM/F12培养基、二甲基亚砜DMSO、胎牛血清FBS作为主要成分，设计了不同配比的冻存保护液，对NSCs冷冻保存进行了研究。分别冻存1周、2周及1个月后台盼蓝染色检测其复苏率，结果显示D10组(70%DMEM/F12+20%FBS+10%DMSO)作为冻存保护液，复苏率分别为(54.00±1.73)%，(59.00±1.16)%，(58.00±2.08)%，显著优于其余各组，且复苏后不影响其原有的生物学特性。此外，本文还对NSCs诱导分化后不同天数的钾通道的变化进行了研究。将培养的第3代NSCs进行诱导分化，对NSCs以及诱导分化后的神经元和星形胶质细胞进行免疫荧光鉴定，并用全细胞膜片钳记录其分化5d,10d,15d,20d钾电流的变化。研究结果表明，去除生长因子后在培养液中添加10%FBS将NSCs诱导分化为神经元和星形胶质细胞，经NSE和GFAP检测均为阳性；膜片钳记录到的钾电流随着分化天数的延长而不断增高，说明诱导后的神经元在电生理功能上逐渐发育成熟。