研究背景及目的:奥沙利铂（OXA）是一种广泛用于治疗晚期转移性结直肠癌、卵巢癌、乳腺癌和肺癌的第三代铂类化疗药物。然而在对肿瘤有效的同时,还对约90%的患者产生严重的周围神经病变（Oxaliplatin-induced peripheral neuropathy,OIPN）,这种周围神经病变是与OXA相关的唯一主要剂量限制性毒性,其特征为外周感觉迟钝和四肢感觉异常。为了减轻这种副作用,临床上曾经用各种药物如抗惊厥剂和三环抗抑郁药来预防,然而,这些药物也会引起很多副作用从而妨碍其广泛应用。目前美国食品和药物管理局（FDA）批准了度洛西汀治疗糖尿病引起的周围神经疼痛,此外,在一项随机的双盲与安慰剂对照的交叉临床试验中,与安慰剂组对比,度洛西汀治疗组患者OXA诱导的CIPN减少的更多。度洛西汀是一种5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂,是一种众所周知的抗抑郁药物。然而,它也被认为有效对抗各种疼痛,如纤维肌痛,骨关节炎膝关节疼痛和慢性下背痛。关于OXA诱导的神经性疼痛,美国临床肿瘤协会（ASCO）基于几项临床试验建议度洛西汀作为治疗化疗所致周围神经病变的药物。但是,度洛西汀作用的部位和机制尚未可知。因此本研究的目的就是在目前此领域专家对OIPN机制的各方实验结果和猜想的基础上,对其机制做初步的探讨。研究方案:第一章:通过MTT法测活性来检测不同浓度度洛西汀对OXA致损伤的DRG细胞影响,选取合适浓度度洛西汀通过轴突染色确定其对轴突是否有保护作用,通过CCK-8法检测度洛西汀对奥沙利铂抗癌效果的影响。第二章:将细胞分组为对照组,OXA模型组,度洛西汀治疗组和单药组,采用蛋白免疫印迹和荧光定量聚合酶链式反应来检测氧化应激和细胞凋亡相关蛋白和mRNA的变化;通过免疫荧光进一步研究度洛西汀治疗细胞损伤过程中p53和SARM的变化;用NAD试剂盒检测细胞中NAD+/NADP的含量;ROS试剂盒检测活性氧的含量以及使用钙成像技术判断奥沙利铂及度洛西汀影响DRG细胞活性的机制。第三章:通过预实验将小鼠分为5组,分别为对照组,OXA模型组,度洛西汀高低剂量组和单药组,每组各10只,给药期间每周进行热刺激和机械性刺激等相关行为学实验。四周后取材,通过免疫组化观察各组小鼠足底表皮纤维密度变化;蛋白免疫印迹法考察度洛西汀对DRG和坐骨神经组织中氧化应激和凋亡相关蛋白表达的影响;通过Real-time PCR技术检测DRG和坐骨神经中相关mRNA表达;通过免疫组化检测度洛西汀治疗DRG组织损伤过程中p53和SARM的变化。第四章:通过流式细胞术、细胞转染及蛋白免疫印迹法进一步探索度洛西汀治疗OIPN的机制与p53-Bax/Bcl2信号通路的关联。研究结果:第一章通过比较各组之间的轴突状态,发现度洛西汀（1μM）能够在一定程度上缓解或减轻DRG神经细胞轴突受奥沙利铂损伤的影响;度洛西汀在细胞水平对于奥沙利铂的抗肿瘤作用无明显的抑制或协同作用。分析第二章结果发现,奥沙利铂诱导的DRG神经细胞损伤主要由细胞凋亡引起,虽然可能与氧化应激无关,但是ROS检测中发现治疗组ROS含量明显高于模型组,说明奥沙利铂与度洛西汀协同作用可能引起DRG神经细胞内ROS增加而进一步引起氧化应激,这个结果还需要进一步证实。不过最终结果表明,度洛西汀能够降低P53-Bax/Bcl2的表达,在一定程度上保护DRG细胞轴突免受损伤,减少细胞凋亡现象。第三章通过分析行为学结果证明小鼠模型造模成功,且度洛西汀能够有效预防奥沙利铂引起的外周神经疼痛;在分析比对各个方法学的不同组别发现,度洛西汀治疗OIPN的机制与p53下游的信号通路（caspase家族或bc12家族）相关,与氧化应激似乎无关联。最后一章通过沉默p53蛋白在DRG细胞上的表达,WB分析结果得出在细胞水平上p53-Bax/Bcl2通路是度洛西汀治疗OIPN的机制通路之一。研究结论:1.度洛西汀缓解OIPN的机制可能与氧化应激无关,但是奥沙利铂和度洛西汀联合使用却使DRG细胞内的活性氧物质升高。2.体外研究显示度洛西汀具有缓解OXA诱导的DRG神经细胞损伤作用,同时对OXA抗癌效果无影响。体内研究显示,度洛西汀对OXA引发的各种疼痛具有显著的预防效果,其中机制可能是通过抑制p53分子以及下游Bax/Bcl2蛋白和caspase家族进一步终止了机体内凋亡程序。综上,度洛西汀作为目前比较有效的治疗OIPN的药物,对其机制的研究有助于未来针对OIPN研制出更为有效的靶向药物。