【摘 要】
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目的:本研究通过探究转化生长因子β1（Transforming growth factorβ1,TGF-β1）参与赖氨酰氧化酶（Lysyl oxidase,LOX）表达的调控,并观察高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞（Human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs）的凋亡情况,初步探讨TGF-β1是否通过调控LOX表达参与高糖诱导的HRMEC
【基金项目】
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国家自然科学基金（82160200）
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目的:本研究通过探究转化生长因子β1（Transforming growth factorβ1,TGF-β1）参与赖氨酰氧化酶（Lysyl oxidase,LOX）表达的调控,并观察高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞（Human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs）的凋亡情况,初步探讨TGF-β1是否通过调控LOX表达参与高糖诱导的HRMECs的凋亡过程。方法:1.将5.5 mmol/L糖浓度设为正常对照组,依次设置浓度为0.1 ng/m L、1ng/m L、10 ng/m LTGF-β1三组并处理24小时,采用Western Blot检测各组中LOX蛋白的表达情况。2.ELISA检测正常组（5.5 mmol/L）、高糖组（30.0 mmol/L）、甘露醇组（30.0 mmol/L）上清液中TGF-β1的表达情况。3.将HRMECs分为5组:正常组（5.5 mmol/L）、高糖组（30.0 mmol/L）、高糖+TGF-β1受体抑制剂（SB525334）组、高糖+二甲基亚砜（Dimethylsulfoxide,DMSO）组、甘露醇组（设置甘露醇浓度为30.0mmol/L,为高糖组的高渗对照）;用TUNEL法分别检测5组中HRMECs的凋亡情况;用q RT-PCR和Western Blot检测正常组、高糖组、高糖+TGF-β1受体抑制剂组、高糖+DMSO组、甘露醇组HRMECs中LOX、TGF-β1、Bax、Bcl-2、Caspase 3/Cleaved Caspase 3 m RNA及蛋白的表达情况。结果:1.Western Blot结果回示:TGF-β1以剂量依赖方式上调HRMECs中LOX的表达（P＜0.05）。2.ELISA结果显示高糖组细胞培养上清液中TGF-β1较正常对照组增高（P＜0.05）。3.TUNEL检测结果显示:与正常组相比HRMECs在高糖环境下细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）;相比高糖组,高糖+TGF-β1受体抑制剂（SB525334）组中凋亡率显著减少（P＜0.05）;q RT-PCR及Western Blot结果回示:与正常组相比,高糖组中LOX、TGF-β1m RNA及其蛋白的表达均显著增高（P＜0.05）;凋亡蛋白Caspase 3m RNA、Cleaved Caspase 3蛋白以及Bax/Bcl2 m RNA及其蛋白的比值增加（P＜0.05）;而在高糖+TGF-β1受体抑制剂（SB525334）组中这些蛋白均发生逆转;而甘露醇组与正常组相比,高糖组与高糖+DMSO组相比,LOX、TGF-β1、凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase 3及抗凋亡蛋白Bcl 2中的蛋白表达均无明显差异。结论:（1）TGF-β1可上调HRMECs中LOX的表达。（2）在高糖环境下,HRMECs凋亡增加,LOX、TGF-β1表达增加。（3）TGF-β1受体抑制剂（SB525334）可降低高糖条件下LOX的表达,并对高糖诱导的HRMECs的凋亡起到一定保护作用。
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