【摘 要】
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目的:探究重楼水提物是否对多药耐药白血病细胞CEM/VCR耐药性具有逆转作用,进一步探讨其逆转耐药性的机制。方法:重楼饮片50g煎煮过滤、旋转蒸发,真空干燥后得重楼水提取物备用;重楼药物溶液稀释8个浓度,作用CEM/VCR细胞24h、48h、72h并计算死亡率,选择适宜的重楼逆转剂浓度;MTT比色实验计算不同浓度的长春新碱（VCR）分别作用于重楼处理组及未加重楼处理组24h、48h、72h后的抑制
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目的:探究重楼水提物是否对多药耐药白血病细胞CEM/VCR耐药性具有逆转作用,进一步探讨其逆转耐药性的机制。方法:重楼饮片50g煎煮过滤、旋转蒸发,真空干燥后得重楼水提取物备用;重楼药物溶液稀释8个浓度,作用CEM/VCR细胞24h、48h、72h并计算死亡率,选择适宜的重楼逆转剂浓度;MTT比色实验计算不同浓度的长春新碱（VCR）分别作用于重楼处理组及未加重楼处理组24h、48h、72h后的抑制率及其半数抑制浓度,并计算两组间逆转倍数;光学显微镜下观察不同浓度不同时间条件下,VCR作用于两组细胞后细胞的形态结构差异;流式细胞术（FCM）检测不同浓度VCR作用于两组CEM/VCR细胞后的凋亡率;RT-q PCR检测VCR的不同药物浓度作用于两组细胞24h、48h后Bax、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、MRP1基因转录情况;Western blot检测VCR不同药物浓度作用于两组细胞24h、48h后Bax、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、MRP1蛋白表达情况。结果:1.重楼净膏得率50g重楼生药饮片中提取得到重楼水提物粉末5.66g,净膏得率11.32%。2.重楼逆转剂浓度确定重楼终浓度0.008μg/m L作为重楼逆转剂浓度,逆转剂作用于CEM/VCR细胞后,需停药培养7天再进行后续实验。3.MTT实验重楼处理组及未加重楼处理组CEM/VCR细胞,在同一时间内随着VCR药物浓度的增加抑制率逐渐增大,且重楼处理组抑制率大于未加重楼处理组。同一药物浓度下,VCR作用时间越长细胞的增殖抑制率越高,且重楼处理组抑制率较未加重楼处理组高。重楼处理组在24h、48h、72h的IC50值分别为17.32μg/m L、13.85μg/m L、6.21μg/m L;未加重楼处理组分别为15.37μg/m L、2.25μg/m L、0.62μg/m L。重楼对CEM/VCR耐药逆转倍数在三个时段为1.13、2.23、3.63倍。4.细胞形态学变化倒置显微镜（100×）下观察,对照组细胞生长状态好,经过不同药物浓度的长春新碱作用后,细胞状态明显变差,数量逐渐减少,有细胞碎片,且相同条件下重楼处理组与未加重楼处理组比较,细胞状态变化更明显;油镜下（1000×）观察,对照组CEM/VCR细胞呈现大而圆的细胞核,细胞膜完整。经过不同浓度的长春新碱作用后,细胞膜逐渐皱缩甚至发生核破裂。且重楼处理组较未加重楼处理组变化更为显著。5.流式细胞术检测细胞凋亡率VCR在同一时间,不同药物浓度下作用于CEM/VCR细胞,随着VCR浓度的增大,凋亡率逐渐增大。VCR在同一药物浓度,随着作用时间的增加,两组细胞的凋亡率也逐渐增大。且同一时间,同一药物浓度重楼处理组细胞凋亡率大于未加重楼处理组。6.RT-q PCR检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、MRP1基因的转录情况结果显示同一时间不同浓度VCR作用下,两组细胞的加药组与对照组比较,均能下调Bcl-2、P-gp、MRP1和上调Bax、Cyt-c基因的表达（P＜0.05）。7.Western blot检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、MRP1蛋白的表达情况结果显示同一时间不同浓度VCR作用下,两组细胞的加药组与对照组比较,均能下调Bcl-2、P-gp、MRP1和上调Bax、Cyt-c蛋白的表达（P＜0.05）。结论:1.重楼可以有效逆转多药耐药白血病细胞CEM/VCR的耐药性,提高CEM/VCR细胞对VCR的敏感性。2.重楼逆转CEM/VCR耐药性的机制:（1）可能与降低药物外排作用有关,通过下调P-gp以及多药耐药相关蛋白MRP1的表达,降低化疗药物外排,增加CEM/VCR细胞内VCR浓度来实现。（2）可能与诱导细胞凋亡相关,通过抑制线粒体介导的凋亡途径中Bcl-2表达,上调Bax、Cyt-c基因与蛋白的表达,从而诱导细胞凋亡来实现。
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