增强玉米抗旱性芽孢杆菌的筛选及菌肥发酵工艺优化

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通过好氧发酵实现畜禽粪便无害化及资源再利用的方式生产微生物有机肥可解决作物肥料问题及集约化的畜禽养殖模式带来的污染问题。植物根际促生菌(plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)是微生物有机肥的核心,筛选并利用增强作物生长发育及抗逆性的PGPR是微生物有机肥研究的重点之一。因此,本研究系统探讨不同的芽孢杆菌(Bacillus)对玉米(Zea mays L.)芽期抗旱性、苗期抗旱性以及玉米产量的影响,筛选出能增强玉米芽期抗旱性、苗期抗旱性以及提高玉米产量的最优芽孢杆菌。并将最优芽孢杆菌与课题组研究得到的优质固氮菌和溶磷菌添加到以羊粪与鸡粪为原料的有机肥发酵体系中,并对发酵工艺进行优化,为羊粪及鸡粪生产微生物有机肥提供必要的工艺参数。主要研究结果如下:1、利用PEG的保水性,配制5%、10%、15%和20%4个浓度的PEG/6000,经过滤除菌及高压蒸汽灭菌两种除菌方式后模拟玉米干旱胁迫的条件。对玉米种子的发芽指标进行统计分析,结果发现适合模拟玉米种子发芽过程中度干旱胁迫的条件为15%PEG。2、干旱胁迫下,对玉米接种贵州不同地区及不同植物根际来源的芽孢杆菌,通过对玉米的发芽指标进行统计分析后,筛选出R29-1、R9、R59与R60对玉米种子发芽过程中的抗旱性具有较好的促进作用。再次将R29-1、R9、R59与R60再次接种于玉米,通过测定及分析玉米的发芽指标及芽的生理生化指标验证R29-1、R9、R59与R60对玉米芽期抗旱性的促进作用。结果表明与对照组相比R29-1、R9、R59与R60芽孢杆菌均能提高玉米芽期抗旱性,其中R60对玉米芽期抗旱性促进作用最强。与此同时玉米芽期的生理生化也体现出4种芽孢杆菌均具有提高玉米芽期抗旱性作用。3、将对玉米芽期抗旱性起促进作用较强的R9、R59、R60接种盆栽玉米根部,通过对于玉米的外观表型及玉米苗期叶片的生理生化指标的测定探究接种这3株芽孢杆菌对玉米苗期抗旱性的影响。结果发现正常情况与干旱胁迫下这3种芽孢杆菌均能够提高玉米生长发育的能力,而且R9、R59、R60对玉米生长发育的促进作用强弱顺序为正常情况下:R60>R59>R9;干旱胁迫下:R60>R59>R9。4、对玉米根部浇淋R9、R59、R60及R29-1菌液进行大田试验,测定玉米产量及其构成因素探究R9、R59、R60及R29-1菌株对玉米产量的影响,结果发现接种不同芽孢杆菌的玉米产量均具有提高作用,且接种后玉米产量高低排序为:R9>R60>R59>R29-1。5、通过从玉米芽期,苗期及田间试验筛选出对玉米抗旱性具有较强促进作用及提升玉米产量的芽孢杆菌后,依据前人的研究基础,对微生物有机肥原料的含水率、p H值、功能菌接种时间进行单因素试验。单因素的结果为:在原料C/N为25:1~35:1、菌剂添加3.5‰的基础上,含水率为60%、p H值为6,功能菌接种时间为腐熟阶段是发酵状态最优的工艺参数。单因素试验后,对最优的单因素参数进行3~4水平的正交试验,正交试验的结果为:含水率为60%,功能菌接种时间为腐熟阶段,p H值为6最佳的发酵工艺即为原料C/N为25:1~35:1、菌剂添加3.5‰的、含水率为60%、p H值为6与功能菌接种时间为腐熟阶段。通过单因素及正交试验后,进行了微生物有机肥小规模发酵生产试验,测定国家微生物有机肥产品各项技术指标,结果为:有效活菌数31×10~8cuf/g、有机质含量为45.81%、p H值为8.2与粪大肠菌群数为121个/g,功能菌枯草芽孢杆菌、固氮菌与溶磷菌数目分别为10.25×10~8cuf/g、6.52×10~8cuf/g与9.34×10~8cuf/g。规模发酵生产试验中生物菌肥产品中有机质含量、有效活菌数、粪大肠菌群数均符合国家生物有菌肥标准(NY/884-2012),其次微生物有机肥具有结构松散,呈棕褐色透气性强等较好的物理状态。综上所述,芽孢杆菌R60对玉米芽期抗旱性、苗期抗旱性、及玉米田间产量均最好高有提升作用,因此选择R60作为玉米抗旱功能菌添加至微生物有机肥中。在微生物有机肥的发酵中,利用羊粪与鸡粪在原料C/N为25:1~35:1、菌剂添加3.5‰的基础上,通过单因素试验及正交试验优化发酵参数,即为原料C/N为25:1~35:1、菌剂添加3.5‰的、含水率为60%、p H值为6与功能菌接种时间为腐熟阶段。经小试阶段,有机质含量、有效活菌数、粪大肠菌群数均符合国家生物有菌肥标准,同时其结构松散,呈棕褐色透气性强等较好的物理状态。因此本工艺参数对羊粪与鸡粪发酵有机肥具有重要的参考价值。
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