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目的:有研究表明5-溴汉防己甲素(5-bromotetrandrine,BrTet)可逆转白血病多药耐药。伊马替尼(imatinib)及尼洛替尼(nilotinib)是抑制白血病细胞增殖的重要药物。本研究探讨伊马替尼、尼洛替尼联合5-溴汉防己甲素作用于耐药白血病细胞K562/A02后柔红霉素(daunorubicin,DNR)对细胞的凋亡率,以及细胞内DNR浓度及mdr1基因及P-gp的表达变化,研究其是否能够增强逆转多药耐药的效果及机制。
方法采用MTT法筛选伊马替尼、尼洛替尼和BrTet的逆转浓度,同样采用上述方法检测DNR联合应用逆转浓度的伊马替尼、尼洛替尼及BrTet时,对K562/A02细胞和K562细胞增殖影响的变化,并计算IC50。采用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测K562/A02细胞凋亡率以及细胞内DNR浓度。用RT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞中mdr1 mRNA和P-gP的表达水平。
结果0.0625μtmol/L伊马替尼、5nmol/L尼洛替尼和0.5μmol/L BrTet单独处理K562细胞和K562/A02细胞48小时后,均无明显细胞毒作用。伊马替尼、尼洛替尼和BrTet单独处理细胞48小时后,DNR对K562/A02细胞的IC50分别为(5.69±+0.28)mg/L、(4.51±0.20)mg/L和(4.11±0.14)mg/L,三组相比有统计学意义(P<0.05)。而伊马替尼和尼洛替尼分别联合使用BrTet处理细胞48小时后,DNR对K562/A02细胞的IC50降为(2.22±0.19)mg/L和(2.99±0.22)mg/L,两组相比有统计学意义(P<0.05)。伊马替尼、尼洛替尼及BrTet单独或联合作用于DNR处理的K562细胞48小时后,各组DNR对K562细胞的IC50差异无统计学意义(P>0.05)。单用伊马替尼、尼洛替尼和BrTet处理后K562/A02细胞凋亡率与对照细胞组比较均无统计学意义(P>0.05),但伊马替尼、尼洛替尼和BrTet均可增加DNR对K562/A02细胞的凋亡率(P<0.05),并且和BrTet联用后,和尼洛替尼相比,伊马替尼具有更强的促DNR对K562/A02细胞凋亡作用,差异有统计学意义。单独使用DNR作用后K562/A02内DNR平均荧光强度为72.33±28.75,伊马替尼、尼洛替尼以及BrTet分别作用后,细胞内DNR平均荧光分别为145.33±13.50、222.33±32.56及651.33±15.18,联合BrTet后,imatinib或nilotinib使K562/A02细胞内DNR平均荧光分别升高为1656.67+62.15及1405.00±55.43,差异有统计学意义(P<0.05)。单用伊马替尼、尼洛替尼和BrTet处理细胞48小时后,K562/A02细胞中mdrl mRNA灰度值分别为0.65±0.02、0.48±0.04和0.44±0.02,伊马替尼联用BrTet后K562/A02细胞mdr1mRNA灰度值下降为0.25±0.03,下降幅度明显高于尼洛替尼联用BrTet组0.35±0.04(P<0.01)。单用伊马替尼、尼洛替尼和BrTet处理K562/A02细胞48小时,P-gp的表达水平为0.74±0.02、0.61±0.05和0.52±0.02;伊马替尼联合BrTet处理后P-gp的表达水平降为0.29±0.02,与尼洛替尼联合BrTet组0.44±0.03相比,差异具有显著性(P<0.01)。
结论单独用药时伊马替尼和尼洛替尼均可部分逆转K562/A02细胞的多药耐药性,并且尼洛替尼逆转强度高于伊马替尼;但联合5-溴汉防己甲素后伊马替尼在增加细胞凋亡率及细胞内DNR浓度和下调mdr1 mRNA/P-gP表达水平上均优于尼洛替尼。