论文部分内容阅读
目的:通过观察祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠视网膜组织中miRNA-155、miRNA-146a和miRNA-182表达的影响,探讨祛风活血丸对EAU大鼠的疗效和作用机制。方法:将SPF级纯系健康雄性Lewis大鼠65只(130眼)根据随机数字表法随机抽取12只作为空白组,其余动物自动成为造模组进行主动免疫,建立EAU大鼠模型,即在大鼠右后腿内侧皮下注射含有35μg视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白(inter-photoreceptor retinoid binding protein,IRBP)和弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,FCA)的乳化液。造模后第4天开始每日在裂隙灯下观察大鼠眼前节表现,参照Caspi评分标准进行炎症评分。连续造模7天后从造模组大鼠中随机抽取2只处死,取眼球制作病理切片,HE染色进行组织病理学检查。将造模成功的EAU大鼠按随机数字表法将其分为模型对照组、阳性对照组、祛风活血丸低倍剂量组、祛风活血丸高倍剂量组。连续灌胃给药14天,取大鼠视网膜组织,运用qPCR法检测视网膜组织中miRNA-155、miRNA-146a和miRNA-182的相对表达量。结果:1、验证EAU大鼠模型:造模第4天可见虹膜血管轻中度充血扩张,眼前节炎症评分为1.45±0.74;造模第7天可见睫状充血及虹膜血管扩张充血加重,前房混浊,房水闪辉,瞳孔缩小,对光反射迟钝或消失,少数出现前房积脓、瞳孔膜闭,眼前节炎症评分为2.62±0.65。造模第7天,大鼠眼球病理切片示角膜后、虹膜、睫状体、视网膜出现不同程度的炎症细胞浸润。以上表明,免疫后第7天,EAU大鼠模型成功建立。2、qPCR检测结果显示:(1)miRNA-155相对表达量:模型对照组与空白组比较,呈现显著高表达,差异具有统计学意义(P<0.01);阳性对照组、祛风活血丸高倍剂量组与模型对照组比较,均呈低表达,差异具有统计学意义(P<0.05);祛风活血丸低倍剂量组与模型对照组比较无统计学意义(P>0.01)。(2)miRNA-146a相对表达量:模型对照组与空白组比较,呈现显著高表达,差异具有统计学意义(P<0.01);阳性对照组、祛风活血丸高倍剂量组与模型对照组比较,前者呈低表达(P<0.05),后者呈显著低表达(P<0.01),差异均具有统计学意义;祛风活血丸低倍剂量组与模型对照组比较无统计学意义(P>0.01)。(3)miRNA-182相对表达量:模型对照组与空白组比较,呈现显著低表达,差异具有统计学意义(P<0.01);阳性对照组、祛风活血丸高倍剂量组与模型对照组比较,均呈显著高表达,差异具有统计学意义(P<0.01);祛风活血丸低倍剂量组与模型对照组比较无统计学意义(P>0.01)。结论:1、利用IRBP和FCA的乳化剂成功建立EAU大鼠模型。2、祛风活血丸能使EAU大鼠视网膜组织中miRNA-155和miRNA-146a表达抑制,促进miRNA-182表达,通过影响miRNA-155、miRNA-146a和miRNA-182的表达从而调控EAU的发展进程。3、miRNA-155、miRNA-146a和miRNA-182可能作为潜在的药物作用靶点用来治疗葡萄膜炎。