内蒙古阿尔巴斯绒山羊是中国珍贵的遗传资源之一,集中分布于内蒙古自治区的西部,其因生产的羊绒质量极优而闻名。绒山羊的绒毛是皮肤毛囊生长出的纤维,其生长修复、自我更新与毛囊中干细胞的周期性增殖、分化迁移有着非常密切的关系,了解毛囊干细胞对绒毛生长调控的机制对提升绒毛的产量及品质有着重要的意义。本研究以阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞（gHFSCs）为研究对象,在进一步优化条件性培养体系的基础上,探讨小分子化合物对其生长特性的影响,为今后深入研究阿尔巴斯绒山羊绒毛的生长发育机理提供实验依据,同时也可以为育种工作提供理论参考。本次研究建立了阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞的纯化体系,并从细胞形态学及分子标记物方面对细胞进行鉴定,通过观察不同培养基培养初级毛囊干细胞（PHFSCs）与次级毛囊干细胞（SHFSCs）的培养效果,探寻阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞生长增殖的最适条件培养基,以便于能够在最短的时间内得到最大数目且纯度相对较高的gHFSCs。在此基础上进一步向PHFSCs培养基中加入小分子化合物Y-27632,通过观察细胞的生长情况,检测毛囊干细胞标志基因表达的变化,探索一定浓度的Y-27632对阿尔巴斯绒山羊初级毛囊干细胞的生长特性产生何种影响。1、gHFSCs的纯化及鉴定结合胰酶差速消化法和Ⅳ型胶原快速贴壁法得到了纯度高、活力强的PHFSCs与SHFSCs,进一步观察细胞的形态学特点、并通过实时定量PCR与Western Blot实验对细胞进行鉴定。结果显示纯化后的细胞与毛囊干细胞的形态学特征相符,并且在转录水平和蛋白水平高表达毛囊干细胞的标志基因p63、CD34、Itgβ1、Lgr5、K19、Sox9,鉴定所得细胞为阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞。2、gHFSCs培养基最适血清添加浓度的筛选及减血清培养体系的建立对不同培养基培养下的PHFSCs与SHFSCs进行形态学观察、检测其增殖活性及克隆形成率。结果显示DMEM/12+6%FBS培养基中的PHFSCs与SHFSCs生长形态最佳,其增殖活性和克隆形成率均显著高于DMEM/F12+2%或10%FBS培养基培养的细胞,筛选出6%FBS为毛囊干细胞基础培养基的最适血清添加浓度。KSR+2%FBS培养基中的PHFSCs与SHFSCs生长形态良好,增殖活性、克隆形成率与KSR+6%FBS、DMEM/F12+6%FBS培养基培养的细胞无显著差异,证明PHFSCs和SHFSCs均可以在减血清培养基中良好生长,成功建立了阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞减血清培养体系。3、ROCK抑制剂Y-27632对PHFSCs的影响研究通过形态学观察、增殖活性、克隆形成率、冻存复苏率及复苏后24 h贴壁率的检测进一步探究不同浓度Y-27632对PHFSCs生长特性的影响。结果显示在培养基中添加10μM Y-27632后,PHFSCs的形态良好,扩增至第11代依旧保持良好的毛囊干细胞形态学特征,其增殖速度与克隆形成率均显著高于对照组及20μM Y27632处理后的PHFSCs。在培养至7-8 d,20μM Y-27632处理后的gHFSCs数目呈现负增长,形成的克隆极少。冻存过程中加入10μM Y-27632,PHFSCs的复苏率及24 h贴壁率显著高于对照组和20μM Y-27632处理组。实时定量PCR和Western Blot检测毛囊干细胞标志物在不同水平下的表达情况,结果显示10μM Y-27632处理后的gHFSCs高表达毛囊干细胞的标志基因p63、CD34、Itgβ1、Lgr5、K19、Sox9,证明10μM Y-27632可以促进PHFSCs的生长增殖,维持其干细胞特性并在冻存过程中对细胞起到保护作用;而20μM Y-27632会抑制PHFSCs生长及克隆的形成。进一步通过CCK-8检测细胞增殖活性发现在培养基中同时添加10μM Y-27632与10μM ERK信号通路抑制剂U0126,PHFSCs的生长速度显著低于10μM Y-27632处理后的PHFSCs并和对照组趋于一致,证明U0126可以逆转Y-27632对PHFSCs的促生长作用,初步推测ERK信号通路与Y-27632促生长的机制相关。