【摘 要】
：
自20世纪70年代末,H.boman等首次在惜古比天蚕中发现天蚕抗菌肽以来,由于抗菌肽类物质分子量较小,具有良好的热稳定和水溶性,以及广谱抗菌等特点,而且与抗生素的抗菌机理完全不同,已成为转基因抗病动植物的基因来源和新型抗菌、抗癌药物研究开发的目标,有着广阔的发展前景。随着对抗菌肽结构、功能和杀菌机理的不断了解,人们开始对其结构进行改造。通过重新设计抗菌肽分子,来研究抗菌肽结构与功能的关系,并期望
论文部分内容阅读
自20世纪70年代末,H.boman等首次在惜古比天蚕中发现天蚕抗菌肽以来,由于抗菌肽类物质分子量较小,具有良好的热稳定和水溶性,以及广谱抗菌等特点,而且与抗生素的抗菌机理完全不同,已成为转基因抗病动植物的基因来源和新型抗菌、抗癌药物研究开发的目标,有着广阔的发展前景。随着对抗菌肽结构、功能和杀菌机理的不断了解,人们开始对其结构进行改造。通过重新设计抗菌肽分子,来研究抗菌肽结构与功能的关系,并期望获得更加高效、低毒的抗菌肽产品已经成为抗菌肽研究的一个重要内容。目前已经发现的抗菌肽,几乎所有都含有大量带正电荷的氨基酸,在本质上都是阳离子型的;在抗菌肽高级结构中,按照肽链结构可分为4类:即α-螺旋、β-折叠、环形、伸展性结构。无论抗菌肽是以α-螺旋,β-折叠还是环形形式出现,两亲结构（具有两个表面,一个亲水,一个疏水）是其共同特征。α-螺旋两亲抗菌肽的主要特点是抗菌肽分布广,数量多,并具有广谱抗性;肽链长度短（<40个氨基酸残基）,易于化学合成和进行结构测定;同时抗菌机理的研究较为明确。因此,目前将α-螺旋两亲抗菌肽的肽链结构作为主要的研究对象。尽管到目前为止还没有对抗菌肽的作用机制有一个详细的了解,但是许多实验表明,α-螺旋抗菌肽分子通过其两性α-螺旋上的正电荷与细菌细胞质膜磷脂分子上负电荷之间的静电吸引而结合在质膜上,紧接着抗菌肽分子的疏水段借助于分子中AGP连接的柔性插入到质膜中,然后抗菌肽分子两亲α-螺旋也插入到质膜中,这样就破坏了脂质双分子层原有的有序结构,由于α-螺旋的两亲性使抗菌肽分子通过膜内分子间的位移而相互聚集在一起,从而在膜上形成离子通道,细菌最终不能保持正常渗透压而致死。α-螺旋抗菌肽的分子结构和抑菌机理表明,抗菌肽的肽链结构,阳离子数量和疏水性与功能密切相关。因此,抗菌肽的结构功能研究以及分子设计,主要从以上三个方面展开。本研究以新疆家蚕cecropin-XJ基因为基础,围绕正电荷含量、疏水性和肽链结构,设计了8个修饰基因:cecropin-M1,cecropin-M2,cecropin-M3,cecropin-M4 , cecropin-M5 , cecropin-M6, cecropin-M7 , cecropin-M8 ,其中cecropin-M1,cecropin-M2,cecropin-M3,cecropin-M4,cecropin-M8使用PCR扩增,cecropin-M5,cecropin-M6,cecropin-M7采用化学合成,修饰基因经过酶切后,构建至pGEX-4T- 1原核表达载体上,利用大肠杆菌BL21表达融合蛋白。SDS-PAGE结果表明所有融合蛋白都得到了表达,其中cecropin-M1为包涵体,其余均为可溶蛋白。经测定,蛋白最佳诱导条件为诱导时间4h,IPTG浓度0.5mM。随后,利用GST树脂纯化大量诱导表达的融合蛋白,经过冷冻干燥后,得到纯化蛋白样品。通过体内抑菌实验和MIC（最低抑菌浓度实验）,对纯化的蛋白进行功能检测。体内抑菌实验结果显示8种经过修饰的抗菌肽均能够抑制大肠杆菌BL21生长,经MIC测定cecropin-M4和cecropin-M8活性最高,分别达到0.16mg/mL和0.19mg/mL,比原cecropin-XJ活性提高了三倍左右。而cecropin-M6和cecropin-M7活性则有较大下降。这一发现将为今后通过分子生物学手段提高抗菌肽活性提供一定科学理论依据。
其他文献
针对盾构管片深化设计流程存在的各层级间信息缺失与分离问题,对现有基于BIM的地铁盾构管片深化设计流程进行系统优化。首先梳理并总结现有预制构件设计流程。以现有流程为基础,根据工作分解结构理论,构建基于BIM的盾构管片深化设计流程,包括管片拆分、基础设计、优化设计、施工图生成和物料明细表生成五个主要阶段。通过深圳市某地铁区间盾构隧道的实践应用,验证所构建流程的可行性。研究成果有助于更好地衔接盾构管片深
城镇老旧小区更新改造中的园林景观设计对满足小区环境卫生安全、美丽宜居具有重要意义。文章选取江西省南昌市京门小区，通过长期实地调研与研究设计，探究城镇老旧小区更新改造中的园林景观设计方法。研究发现，城镇老旧小区更新改造中的园林景观设计应运用以文化为基础、以自然为原则、以公共服务能力为目标、以卫生健康为基本要求的“四位一体”的理论与实践模式，即以“文化式”的景观园林设计进行更新改造。
发展壮大村级集体经济是强农业、美农村、富农民的重要举措，是实现共同富裕、实施乡村振兴战略的重要保证。农村集体产权制度改革已基本完成，发展集体经济各种条件已经具备且已成熟。本文阐述了村级集体经济发展现状，总结了发展壮大农村集体经济的典型案例模式，并提出了发展壮大村级集体经济的建议，以期为村集体经济的发展提供参考。
随着《民法典》的出台及《未成年人保护法》的修订实施，我国未成年人抚养权归属的酌定亦愈发要求依“儿童最佳利益”原则而来的“子女最佳利益”原则行事。然而，由“子女最佳利益”原则考量而来的离婚后未成年子女抚养权归属原则歧义多变，如《民法典》第1084条第2款的规定。本文建议，应基于“子女本位”主义的“子女最佳利益”原则，融合父母性别平等视角，综合考量符合该原则标准的诸多重要现实因素，作出最有利于未成年人
本试验旨在研究微生物饲料添加剂对固原黄牛生长性能和瘤胃微生物区系的影响。本研究选取12月龄固原黄牛56头（公母各占1/2），随机分为对照组和试验组，每组公母牛各2个重复，每个重复7头公（母）牛。对照组饲喂不含微生物饲料添加剂的全混合日粮（TMR），试验组在对照组饲粮的基础上添加2 g/kg微生物饲料添加剂。预试期7 d，正试期60 d。结果表明：1)虽然试验组全期（第1～60天）平均日增重（ADG
本论文在对采自新疆12个采集点的200多份地衣标本鉴定的基础上,首先从形态学,解剖学,化学成分分析和生态学角度上对新疆微孢衣属地衣进行初步的研究。本论文共报道30种,其中20种为中国新记录种,4种为新疆新记录种。20种中国新记录种,即A.assimulans,A.atrata,A.badiofusca,A.bicolor,A.capensis,A.fuscata , A.gallica , A.g
以主要的适生盐生植物灰绿藜为研究对象,通过盆栽实验,研究它们在不同盐分（0mmol/L-对照、100mmol/L、200mmol/L、300mmol/L、400mmol/L、500mmol/L）胁迫下,随胁迫时间的延长,植株各部位中基本成分（水分、金属元素、总氮、脯氨酸、总糖、甜菜碱含量）的变化,分析灰绿藜在应对盐胁迫时这些成分的动态变化趋势,为进一步了解其耐盐、抗盐的生理生态机制和掌握灰绿藜对盐
抗冻蛋白（antifreeze proteins, AFPs）是一类可以抑制冰晶生长的功能性生物大分子,它能以非依数性形式降低溶液的冰点而不影响其熔点,从而导致溶液冰点和熔点的差异,这种差异称为抗冻活性或热滞活性（thermal hysteresis activity, THA）。AFPs作用于冰晶或是冰核的表面而抑制它们的生长。根据它这一特性,生物有机体可以避过严寒天气所带来的伤害。这类蛋白分布
新疆家蚕抗菌肽（Cecropin-XJ）是一种含37个氨基酸,线性α螺旋,阳离子,具有热稳定性,广谱（革兰氏阳性细菌,革兰氏阴性细菌,真菌,肿瘤细胞等）杀菌能力的小分子肽。Cecropin-XJ对革兰氏阳性细菌的作用尤其明显。抗菌肽结构的多样性决定其功能和作用方式的多样性,因此抗菌肽的抗菌机制没有统一的解释。目前对于抗菌肽的抗菌机理主要存在有五种学说,并且主要集中在抗菌肽与细菌细胞膜作用方面。Ce