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鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisepticum，MG）是鸡的慢性呼吸道病（Chronic respiratory disease，CRD）的病原菌。多年来许多国家对MG感染的防制非常重视，但迄今为止仍未找到理想的根除方法。用疫苗作免疫预防是传染病防制的有效手段，但实践中MG疫苗的使用效果并不尽人意。目前，鸡毒霉形体疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗两种，但由于灭活疫苗生产成本高，弱毒疫苗存在一定的脆弱性及对非目标鸡群的威胁，这就制约了这两种疫苗的使用。所以，寻找到MG免疫原性强的蛋白质来研制蛋白亚单位疫苗是鸡群MG感染预防和净化的有力保证。霉形体的部分抗体可抑制霉形体的生长代谢，这一点与病毒的中和抗体类似。因此，代谢抑制性单克隆抗体所针对的菌体蛋白，理论上应该是MG菌体抗原中的主要保护性抗原，本研究为了探索MG菌体抗原中，哪些是具有免疫保护性的MG蛋白抗原，拟制备针对MG的特异性单克隆抗体，通过代谢抑制试验来筛选在体外能抑制MG代谢的单克隆抗体，再以筛选出的代谢抑制性单抗确定MG抗原性蛋白，为MG表达蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。本研究的主要内容及结果如下。1．鸡毒霉形体MG-S6单克隆抗体的研制以MG-S6菌体悬液为抗原，按照一定的免疫程序免疫6周龄的BALB／c小鼠，将制备的免疫脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经三次细胞融合，以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，对阳性杂交瘤细胞进行多次克隆最终获得24株针对MG-S6的特异性单克隆抗体。经检测这些单抗腹水及细胞培养上清的间接ELISA效价分别在1.00×103～2.05×106和2.00×101～2.56×103之间；获得的杂交瘤细胞的染色体数目在79～95之间；从24种单抗中选出11种抗体效价较高的单克隆抗体腹水并测定其相对亲和力。结果表明，单抗1086b株杂交瘤细胞所分泌单抗具有50％OD450值的稀释度最高，浓度最低，即与MG-S6全菌体抗原的亲和力最高，其次为3G4b、1086a、1086c、1688a、1688b、3G4a、16G9a、16D5、16G9b和1684b。2．鸡毒霉形体代谢抑制性单克隆抗体的筛选及其抗抗原表位分析以本研究制备的24株单克隆抗体对1000CCU的MG-S6菌液分别进行代谢制试验，经三次重复试验，筛选到11株对MG-S6有明显代谢抑制作用的单克隆抗体将11株单克隆抗体分别与MG-S6全菌体抗原SDS-PAGE电泳分离条带进行Western-blot反应，结果183和3G4b单抗与56KD蛋白反应；16D5与105KD蛋白反应；1086b、1688b与64KD蛋白反应；7G9a、7G9b、17C5a、16G9a与42KD蛋白反应；17C5b出现了三条显色带分别在105KD、66KD和41KD的位置；16H6b出现了两条显色带，分别在42KD和29KD的位置。根据本试验结果，初步可判断MG-S6中105KD、66KD、64KD、56KD、42KD、41KD、29KD蛋白有较强的免疫原性，说明代谢抑制性单克隆抗体所对应的菌体抗原不是一类抗原，他们在菌体表面存在多样性，预示着今后我们制备基因工程疫苗，应该选取尽可能多的抗原蛋白作为免疫原，才能达到更好的免疫效果。