目的:以斑马鱼为研究对象,研究芒果苷与其苷元在生物样本中含量的差异及药物之间的相互作用,并与传统的研究方法结果进行对比。为斑马鱼用于药物非临床研究提供研究数据。方法:(1)建立生物样本中芒果苷与其苷元的HPLC方法:建立芒果苷与其苷元在SD大鼠血浆、斑马鱼体内含量测定的方法学研究,包括线性关系、回收率、精密度、重复性、稳定性等。(2)芒果苷与其苷元的SD大鼠血浆蛋白结合率研究:SD大鼠腹主动脉采血,离心分离血浆后,备用。芒果苷设定低(2.50μg/ml)、中(7.50μg/ml)、高(15.00μg/ml)三个浓度,芒果苷元设定低(10.0μg/ml)、中(25.0μg/ml)、高(50.0μg/ml)三个浓度,采用超滤法,分别测定芒果苷与其苷元的血浆蛋白结合率、两者相互作用后血浆蛋白结合率的变化。(3)芒果苷与其苷元在斑马鱼体内含量的研究:首先通过预实验确定斑马鱼的最佳采样时间点。芒果苷、芒果苷元分别设定低(50.0μg/ml)、中(100.0μg/ml)、高(150.0μg/ml)三个浓度作为斑马鱼的培养液,每个浓度平行3组,经过一段时间培养后,分别捞出处死,经过系列处理,根据“生物样本中芒果苷与其苷元的HPLC研究”,测定斑马鱼体中芒果苷与其苷元在斑马鱼体的含量差异以及两者相互作用后在斑马鱼体内含量的变化。(4)斑马鱼在体研究方法与超滤法的对比及影响因素的考察:以实验耗材、成本、适应范围等为指标,对比两种研究方法的差异。另外考察温度、p H、光照时间等影响因素,探讨因素的改变对鱼体内药物含量的影响。结果:(1)血浆中芒果苷与其苷元测定的色谱条件为:检测波长:258 nm;柱温:30℃;进样10μl;流动相为:甲醇(A)和0.1%甲酸(B)溶液,进行梯度洗脱;斑马鱼体中芒果苷与其苷元测定的色谱条件为:检测波长:258 nm;柱温:30℃;进样量20μl;流动相为:乙腈(A)和0.1%甲酸溶液(B),进行梯度洗脱;色谱柱岛津C-18柱(250×4.6 mm,5μm)。SD大鼠血浆中芒果苷回归曲线方程为:A=4.40×10~6C+1.33×10~2,r2=0.9984,芒果苷在0.10-0.52μg/ml范围内线性关系良好;芒果苷元回归曲线方程为:A=6.12×10~5C+1.30×10~2,r2=0.9987,芒果苷元在0.20-3.00μg/ml范围内线性关系良好。斑马鱼体中芒果苷回归曲线方程为:,r2=0.9986,芒果苷在0.20-10.02μg/ml范围内线性关系良好;芒果苷元回归曲线方程为:,r2=0.995,芒果苷元在1.00-100.01μg/ml范围内线性关系良好。SD大鼠血浆中芒果苷与其苷元供试品溶液的超滤膜回收率均在90-115%之间;斑马鱼体中芒果苷与其苷元的提取回收率均在45-85%之间;芒果苷与其苷元在SD大鼠血浆、斑马鱼体样本的日内精密度、重复性、稳定性的RSD%值均小于15%。(2)芒果苷低、中、高三个浓度的血浆蛋白结合率分别为:94.40±0.03%、97.06±0.01%、97.93±0.03%;芒果苷元低、中、高三个浓度的血浆蛋白结合率分别为:94.23±0.02%、95.81±0.17%、96.78±0.03%。两药相互作用后,对于芒果苷,随着芒果苷元浓度的增加,低、中、高三个浓度的芒果苷血浆蛋白结合率分别为:98.76±0.18%、98.13±0.03%、95.07±0.05%;98.33±0.08%、96.79±0.13%、92.80±0.08%;97.19±0.11%、94.81±0.11%、86.26±0.07%。对于芒果苷元,随着芒果苷浓度的增加,低、中、高三个浓度芒果苷元的血浆蛋白结合率分别为:98.80±0.08%、97.40±0.07%、96.58±0.08%;98.79±0.06%、97.76±0.15%、95.53±0.04%;98.72±0.07%、95.16±0.16%、83.82±0.15%。(3)通过实验发现,当培养时间为10 h时,斑马鱼体内药物的含量达峰值。芒果苷低、中、高三个浓度的斑马鱼体内含量分别为:0.173±0.017μg/g、0.316±0.020μg/g、0.686±0.066μg/g。芒果苷元低、中、高三个浓度的斑马鱼体内含量分别为:1.773±0.150μg/g、4.932±0.211μg/g、6.751±0.205μg/g。两药相互作用后,对于芒果苷,随着芒果苷元浓度的增加,低、中、高三个浓度的芒果苷在斑马鱼体内的含量分别为:0.350±0.035μg/g、0.242±0.016μg/g、0.222±0.016μg/g;0.739±0.044μg/g、0.454±0.024μg/g、0.372±0.025μg/g;0.877±0.013μg/g、0.780±0.026μg/g、0.350±0.034μg/g。对于芒果苷元,随着芒果苷浓度的增加,低、中、高三个浓度的芒果苷元在斑马鱼体内的含量分别为:1.031±0.056μg/g、0.551±0.003μg/g、0.215±0.012μg/g;3.751±0.112μg/g、2.590±0.038μg/g、1.959±0.071μg/g;9.553±0.118μg/g、6.693±0.209μg/g、4.621±0.177μg/g。(5)斑马鱼在体研究方法(A)与超滤法(B)对比结果:对象获得容易程度A>B;研究成本AB;生理活性A可增加p H、温度等因素的考察;通过各项影响因素的考察发现,温度、p H、光照时间的改变,会对鱼体内药物的含量产生较大的影响。当温度等于35℃,p H等于4,光照时间等于5h时,斑马鱼体内药物含量最高。结论:(1)本研究所建立的生物样本中芒果苷与其苷元RP-HPLC分析方法,具有灵敏、快速、稳定的特点,满足生物样本测定的基本要求。(2)用斑马鱼在体研究方法与超滤法的结果具有相似性,可用于药物蛋白结合率、药物相互作用等方面的研究,拓展斑马鱼在药动学研究领域的应用。温度、p H、光照时间各项因素的改变对斑马鱼体内药物的含量有影响,在今后的研究中应将这些因素考虑进去。