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目的:本文利用传统道地药材刺五加为原料提取刺五加糖蛋白,对刺五加糖蛋白进行了分离与纯化,并系统的研究了刺五加糖蛋白的理化性质、组成及构效关系;通过体内外试验探究刺五加糖蛋白对于皮肤的保护作用,在紫外线引起的皮肤光损伤中的修复作用及机制,并进一步从蛋白组学的角度,对其发挥抗氧化活性的起效蛋白进行初步探索,找到目的蛋白再进行多肽的体外合成,以期为刺五加糖蛋白药效活性物质的研究开拓新的领域,为更好的利用刺五加糖蛋白,开发用于皮肤保护及修复光损伤的相关产品提供理论支持。方法:（1）利用响应曲面法,采用恒温恒速震摇法提取得到刺五加糖蛋白,以刺五加的蛋白得率为单因素评价指标,筛选刺五加糖蛋白的最佳提取工艺。利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）确定蛋白纯度和分子量,运用蛋白质免疫印迹（western blot,WB）考察刺五加糖蛋白的抗O-乙酰氨基葡萄糖（O-Glc NAc）修饰位点;另外,通过测试中性糖、酸性糖的含量以及考察刺五加糖蛋白的紫外光谱、红外光谱、单糖组成、氨基酸组成分析进行结构分析。（2）运用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（3-（4,5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT）法与细胞划痕实验,考察刺五加糖蛋白对于人永生化角质形成细胞（human keratinocytes Cell,Ha Ca T）的增殖与迁移的促进作用;同时建立大鼠皮肤光老化模型,从外观形态、皮肤组织形态以及光老化皮肤的生物超微弱发光（ultra-weak photon emission,UPE）评价刺五加糖蛋白对大鼠光老化皮肤的治疗作用,对大鼠皮肤组织进行苏木素-伊红（Hematoxylin Eosin,HE）和醛品红染色处理,进而观察大鼠皮肤组织形态学变化,测定大鼠皮肤组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽还原酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）以及羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）的水平变化,基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinases-1,MMP-1）、基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinases-3,MMP-3）、炎症因子白介素-1β（interleukin-6,IL-1β）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的含量变化,初步探讨刺五加糖蛋白对大鼠皮肤光老化的治疗作用及机制。（3）对刺五加糖蛋白的目的蛋白进行蛋白组学鉴定与多肽的体外合成,而后进行相关的体外抗氧化验证,找到刺五加糖蛋白中的起效蛋白。结果:（1）通过单因素及响应曲面法,得到刺五加糖蛋白的最佳提取工艺为:提取时间12 h/次,共3次;液料比1:16;缓冲液p H值为8;提取温度70℃;振摇速度180 rpm。最佳提取工艺制得的纯化后的刺五加糖蛋白蛋白含量为32.12%,中性糖含量为16.27%,酸性糖含量为24.77%。SDS-PAGE结果显示刺五加糖蛋白的蛋白分子量主要集中在25k D左右,表明此大小的蛋白含量较高,可以进一步作为重点研究对象。紫外光谱发现糖肽键的类型为O-糖肽键;刺五加糖蛋白具有抗O-Glc NAc修饰,同时发现糖基化修饰的蛋白也集中在25k D附近,证明含量最高的蛋白上富含糖基化修饰位点;红外光谱实验发现刺五加糖蛋白样品在3300 cm-1,2900 cm-1,1000-1075cm-1左右均有吸收峰,证明多糖和蛋白分子同时存在;确定刺五加糖蛋白中的单糖种类主要是葡萄糖、鼠李糖、木糖;通过氨基酸组成分析结果可知刺五加糖蛋白含有18种氨基酸,其中8种为人体必需氨基酸。（2）通过MTT与细胞划痕实验结果显示,刺五加糖蛋白对于Ha Ca T具有促进增殖和迁移作用,刺五加糖蛋白能够有效改善大鼠光老化皮肤的皮肤角质层增厚、弹性纤维断裂,聚集成团以及背部氧化应激反应,UPE光子信号增强等现象;与模型组相比,经刺五加糖蛋白药物干预后皮肤组织中MDA含量明显下降,GSH-Px、SOD酶活力以及HYP含量明显提高,炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α含量,基质金属蛋白酶MMP-1和MMP-3的分泌得到显著抑制。（3）经蛋白组学鉴定出刺五加糖蛋白25KD附近具有4个主要蛋白,5条多肽肽段,并对肽段进一步进行合成,结果显示5条多肽肽段中VFDKDQNGFISAAELR-（Cam）,抗氧化性极好,推测其为刺五加糖蛋白中的主要起效蛋白。结论:建立了刺五加糖蛋白的提取纯化工艺;对糖蛋白进行了组成与结构研究,采用紫外光谱与红外光谱扫描,测定了单糖组成与氨基酸组成,最终得到最佳提取工艺并确定其构型;通过体内外实验,运用UPE技术、HE和醛品红组织切片染色及Elisa试剂盒等得出刺五加糖蛋白能够有效修复大鼠皮肤光老化的损伤;通过对刺五加糖蛋白进行蛋白组测序,鉴定后对其中的肽段结果进行合成,合成后经体外抗氧化实验验证得到,推测VFDKDQNGFISAAELR-（Cam）为刺五加糖蛋白中的起效蛋白。