肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子的表达及其意义

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目的:肾癌是人体恶性肿瘤较常见的一种,在泌尿系统发生的肿瘤中约占第二位,对人类身体健康构成重大威胁。肾癌在早期无明显症状,一部分于体检时发现,近50%的就诊病人已属晚期,约30%病人就诊时已有了肿瘤转移,近40%的病人出现术后复发或转移,3年及5年生存率较低。肾癌中大多数为肾透明细胞癌,占肾癌总数的70~80%,肾癌的临床治疗主要是手术,术后生物免疫治疗有一定疗效,化疗和放疗效果差。这样就有必要加深研究人体免疫系统在肾癌发生发展及转归中的作用。本课题旨在通过检测肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系,为肾癌生物免疫治疗、基因治疗及其化疗提供研究资料。 材料:标本均来自石家庄市第二医院和解放军260医院泌尿外科,其中肾透明细胞癌30例、癌旁组织(距肿瘤组织边缘2.0cm以上)30例、意外伤亡正常肾组织10例。 方法:上述标本离体后分成三组,1、肾透明细胞癌组;2、癌旁组织组;3、正常肾组织组,均用10%的福尔马林固定48小时,常规石蜡包埋、切片5 μm,同时应用HE染色法、TUNEL法及免疫组织化学方法进行观察研究。 结果:1.HE染色结果:正常肾组织镜下可见肾皮质迷路内有许多大小不等球形小体为肾小体,周围则为大量不同断面的(主要为横断面)肾小管,其中着色为深红色的为近曲小管曲部,而染色稍浅的则为远端小管曲部,细胞排列整齐,胞质染色深。肾透明细胞癌组织镜下可见肿瘤细胞体积较大,圆形或多边形,胞质染色浅,透明或颗粒状,核固缩,间质富有毛细血管和血窦。 2.TUNEL检测结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生。凋亡肾组织细胞表现为染色质凝集、边集,核固缩。正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,棕黄色颗粒颜色较深,高于正常肾组织组,肾癌组织阳性表达最少,实验显示癌旁组织AI:0.415±0.052,正常肾组织组AI:0.272±0.029;肾癌组织AI值:肾癌1期组:0.185±0.021,2期组:0.180±0.019,3期组:0.164±0.022,4期组:0.163±0.017,肾癌4个期之间比较无显著性差异(p>0.05);两两比较结果显示:正常肾组织组与肾癌组,正常肾组织组与癌旁组,肾癌组与癌旁组之间均有明显差异(p<0.01)。 3.PCNA免疫组化染色结果:正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,PI值:0.263±0.030;癌旁阳性表达稍增加,PI值:0.405±0.049,高于正常肾组织,有明显差异性(p<0.01)。肾癌组织阳性表达明显增多,棕黄色颗粒颜色较深,PI值:肾癌1期组0.599±0.054。2期组0.642±0.044。3期组0.696±0.046。4期组0.642±0.044,明显高于癌旁组织,有显著性差异(p<0.01)。肾癌4个期之间比较无显著性差异(p>0.05)。 4.Caspase-3免疫组化结果: Caspase-3在正常肾组织中可见少量弱的阳性反应,阳性染色光密度值为:0.281±0.033。 癌旁组织阳性表达增加,阳性染色光密度值为:0.347±0.030。棕黄色颗粒颜色较深,阳性染色见于细胞胞膜及胞浆;肾癌组织表达明显减少,阳性染色光密度值为:肾癌1期组0.152±0.025,2期组:0.138±0.021,3期组:0.131±0.031,4期组:0.124±0.022,在胞膜及胞浆表达,棕黄色颗粒颜色较浅。两两比较结果显示,三组之间均有明显差异(p<0.01)。肾癌4个期之间比较无显著性差异(p>0.05)。 5.Caspase-9免疫组化结果:Caspase-9在正常肾组织中可见少量弱的阳性反应,阳性染色光密度值为:0.216±0.029,癌旁组织阳性表达增加,阳性染色光密度值为:0.314±0.014,棕黄色颗粒颜色较深,阳性染色见于细胞胞膜及胞浆;肾癌组织表达明显减少,阳性染色光密度值为:肾癌1期组0.132±0.035,2期组:0.116±0.030,3期组:0.107±0.032,4期组:0.103±0.028,在胞膜及胞浆表达,棕黄色颗粒颜色较浅。两两比较结果显示,三组之间均有明显差异(p<0.01)。肾癌4个期之间比较无显著性差异(p>0.05)。 结论:癌旁组织Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达部位,以近曲小管最强,为深棕红色,集合管次之,为浅棕黄色,而髓袢及肾小球无表达,肾癌组织Caspase-3、Caspase-9的表达多分布于肾癌细胞的细胞膜或胞浆。Caspase-9和Caspase-3的表达具有良好的共位性,Caspase-9高表达的组织和区域,Caspase-3也相对的高表达,Caspase-9低表达的组织和区域,Caspase-3也相对的低表达。 PCNA阳性细胞个数在正常组、癌旁组、癌组织组的表达呈明显加强趋势;而TUNEL、Caspase-3、Caspase-9在癌旁组呈强阳性表达、正常组较弱、在癌组织中只有微量的表达。癌旁组织Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达最少;而PCNA则相反,癌组织高于癌旁组织和正常肾组织,正常肾组织表达最少。癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,PCNA表达升高说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。 Caspase-3、Caspase-9、PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间无明显差异性。
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