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禽白血病（Avian Leukosis,AL）是由禽C型逆转录病毒群的禽白血病病毒（Avian Leukosis virus,ALV）引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称。ALV可以垂直传播和水平传播,但以垂直传播为主。家禽感染ALV后会引起生长发育迟缓、产蛋性能下降、免疫抑制等临床症状,严重影响养禽业的健康发展。近年来,鸡群ALV感染和临床发病时有发生,且常用的ELISA等方法检测成本高,推广范围窄。因此,研究建立新的敏感、特异、快速、简便的ALV抗原抗体检测方法,对于AL的防控具有重要的实际应用意义。本研究利用原核表达系统pET-30a（+）-p27表达了分子量约为28 KD的ALV p27蛋白并通过葡聚糖凝胶柱进行亲和层析纯化;免疫印迹分析验证了p27蛋白的免疫原性。将已制备的ALV单克隆抗体2E5、3D5小鼠腹水经Protein A亲和层析柱纯化,并基于胶体金免疫层析技术,与另一商品化ALV单抗一起进行组对检测,筛选出可检测ALV的适宜抗体对2E5、3D5。本研究建立了检测ALV抗原的荧光微球免疫层析方法。将ALV单抗2E5作为示踪抗体与时间分辨荧光微球耦联,以单抗3D5为捕获抗体包被在检测线上,羊抗鼠Ig G为质控抗体包被在质控线上,制备了检测ALV p27抗原的荧光微球免疫层析试纸条。对检测条件进行了优化的结果显示,将不同检测样本用PBS缓冲液进行20倍稀释,取97μL样本与3μL荧光微球耦合物,室温孵育5 min加样,15 min依据T/C值判定结果。为了检测本方法的灵敏度,利用制备的荧光微球免疫层析试纸条对p27蛋白连续10倍比例逐级稀释后检测,结果表明本方法可检测出30 ng/m L的p27蛋白。特异性检测试验结果表明,ALV为阳性,NDV、AIV、IBDV、IBV等病毒均为阴性。保存稳定性试验结果表明,连续测试了室温下保存6个月试纸条,其T/C值无变化;重复性试验表明,该检测方法的批内变异系数不高于1.00%,批间变异系数不高于2.37%。用所建立的方法对临床收集和制备的289份样本（包括胎粪、棉拭子等）进行了检测,同时与PCR方法进行比较,总体符合率达到99.31%。本研究建立了检测ALV抗体的荧光微球免疫层析方法。将p27蛋白与荧光微球耦联,以兔抗鸡Ig G为捕获抗体、单抗3D5为质控抗体,制备了ALV抗体荧光微球免疫层析检测试纸条。本方法经优化最佳反应条件为:检测样本用PBS缓冲液进行50倍稀释,取98μL样本与2μL荧光微球耦合物,室温孵育5 min加样,15 min后根据T/C判定结果。通过与商品化的ELISA方法比较,两者对同一阳性血清的最低检出限均在10-5,验证了本方法的灵敏度。为了检测本方法的特异性,将ALV血清与ND血清、AIV血清、IBDV血清等对比,结果发现除了ALV血清为阳性,其余均为阴性。连续检测了室温下保存6个月的试纸条,其T/C值变化不大;重复性试验表明该检测方法的批内变异系数低于1.03%,批间变异系数低于2.99%。用建立的方法的检测了61份血清样本,与商品化ELISA检测试剂盒比较,其符合率为93.44%。综上所述,本研究所建立的检测ALV抗原、抗体的荧光微球免疫层析检测方法,具有敏感、特异、快速、简便、稳定等特点,可快速有效的检测鸡群ALV的感染,适合鸡场现场快速检测和兽医临床快速检测诊断,为ALV抗原、抗体的快速检测提供了新的技术支持,对于我国养禽业ALV的防控与净化具有重要意义。