论文部分内容阅读
翘嘴鲌（Culter alburnus）是中国名贵的鲤科（Cyprinidae）淡水鱼类，具有很高的经济价值。但由于过度捕捞，导致天然资源日益减少，其市场需求日趋紧张，因此，翘嘴鲌具有良好人工养殖前景。鱼类的肉质风味、口感等是影响其受消费者欢迎程度的重要因素。目前，从分子水平对鱼类肉质进行的研究越来越多，许多鱼类肉质性状候选基因被逐渐发掘出来，其中脂蛋白酯酶（idella lipoprotein lipase，LPL）和脂肪酸结合蛋白家族（fattyacidbindingproteins，FABPs）已被广泛研究。本研究根据Genbank中已知的鲤科鱼类LPL和H-FABP基因序列设计引物，采用RT-PCR和RACE技术克隆出翘嘴鲌脂蛋白酯酶（idella lipoprotein lipase，LPL）和心型脂肪酸结合蛋白（Heart FABP）的部分cDNA序列，再利用获得的序列设计引物扩增出其他部分的cDNA序列，将所得序列进行拼接，得到全序列；采用荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测了两者在兴凯湖翘嘴鲌心脏、肝脏、脾、中肾、脂肪、肌肉、性腺及鳃等组织中的表达量。试验结果如下：1.获得了翘嘴鲌H-FABP基因部分CDS区，并采用RACE技术克隆得到该基因的3’端和5’端未知区域，序列拼接后得到778bp的cDNA序列，其中包括编码133个氨基酸和一个终止密码子的完全CDS区序列（402bp），完整的3’UTR（242bp）区和5’UTR区（134bp）。2.通过Blast比对显示翘嘴鲌H-FABP基因CDS区与鲤鱼（Cyprinus carpio）、齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）的同源性达91%；H-FABP基因氨基酸同源性比对显示与虹鳟的同源性为76%；与斑马鱼的同源性为85%，翘嘴鲌比斑马鱼在462位多两个氨基酸，分别为谷氨酰胺（Q）和半胱氨酸（C）。3.得到翘嘴鲌LPL基因的一部分CDS区，使用普通PCR分段克隆剩余序列并采用RACE法获得该基因的5’端和3’端未知区域，进行序列拼接，获得由编码502个氨基酸和一个起始密码子的完全CDS区序列（1524bp）以及5’UTR（159bp）区和部分的3’UTR区（423bp）组成的共1947bp的基因组序列，Genbank登录号为KC166231。4.核苷酸同源性比对显示翘嘴鲌LPL基因CDS区与草鱼（Ctenopharyngodon）的CDS区核苷酸同源性达到98%；草鱼（Ctenopharyngodon），鲢（Hypophthalmichthys molitrix），鳙（Aristichthys nobilis）的同源性达到97%以上；与鲤（Cyprinus carpio），斑马鱼（Danio rerio），鲫（Carassius auratus）等鲤科鱼类的同源性为90%。5.对翘嘴鲌7个组织（鳃、心脏、肠、肝脏、肌肉、肾脏、脾脏）进行H-FABP和LPL基因表达分析。Real-time PCR结果表明，翘嘴鲌H-FABP基因mRNA在肝脏中表达量最高，且与其他组织表达量差异显著（p<0.05），在心脏、肌肉、肠、脾组织中的表达量次之，再次是肾脏、鳃组织中的表达量。LPL基因mRNA在心脏当中表达水平最高，脾和肝脏中的表达量次之，其他组织中表达量较低，但差异不显著（p>0.05）。