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目的卵巢恶性肿瘤是女性生殖器三大恶性肿瘤之一,至今缺乏有效的早期诊断方法,约60%的病人发现时已有广泛的腹膜转移和大量腹水,而对于晚期者,又缺乏有效治疗,5年存活率仍较低,因此卵巢癌已成为严重威胁妇女生命的肿瘤之一。关于卵巢癌报道最多的显著预后指标包括疾病分期、肿瘤分级、组织类型和外科减灭术的范围。然而,还存在一个问题,即同样的预后亚群中存在显著的生物学异质性,这会影响各个病例临床预后的准确性。因此,我们必须更进一步的了解卵巢癌生物学行为相关的分子决定物,以便鉴定出存在特别不良预后的患者群。微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance proteins,MCMs)是DNA复制启动和延伸的必需因子之一,MCM蛋白的阳性表达是细胞具有增殖能力的重要标志。其在消化、呼吸、泌尿、生殖系统等各种不同类型的肿瘤组织中都有异常的表达,且表达水平与细胞增殖程度成正相关,而与肿瘤组织的分化程度呈负相关,可作为肿瘤和癌前病变的标志物,也可作为肿瘤预后评价的参考指标。与PCNA、Ki-67等传统评价指标相比,是一种更理想的细胞增殖标记物,更能准确地反映细胞的增殖活性。本实验应用免疫组化方法观察卵巢上皮性肿瘤组织中MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表达,了解其与卵巢癌的临床病理特征、常用的增殖因子Ki-67和病人预后情况的关系,探讨其分子生物学和临床意义。材料与方法1.组织标本收集2005年3月至2008年10月在中国人民解放军第二0二医院病理科术后存档的96例卵巢上皮性肿瘤组织石蜡标本,其中卵巢上皮性癌55例、交界性上皮性肿瘤29例、良性上皮性肿瘤12例,所有患者手术前均未进行化疗、放疗或其他抗癌治疗。全部卵巢癌病例进行随访,平均随访时间30个月,最短8个月死亡,最长随访时间50个月。2.免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化(S-P法),检测96例卵巢上皮性肿瘤组织中MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白的表达。结果判定：每张切片在低倍镜下选择5个阳性细胞最密集、背景最清晰区域,每个区域在高倍镜下计算100个细胞中阳性细胞数,取5个区域阳性细胞数的平均值作为其标记指数。阴性(-)：标记指数<10%；弱阳性(+)：标记指数10%-25%；阳性(++)：标记指数25%-50%；强阳性(+++)：阳性细胞数≥50%。以阳性细胞数≥25%为阳性病例。3.统计学处理采用SPSS(V13.0)软件数据进行X2检验、Wilcoxon秩和检验、Spearman等级相关分析、Kruskal Wallis检验、Mann-Whitney检验和Log Rank检验。取a=0.05为标准,p<0.05为有差异性,p<0.01为有显著性差异。结果1、MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白在卵巢上皮肿瘤组织中表达情况在全部病例中MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白的表达的平均数分别为17.04%、19.79%、21.19%和15.45%。染色的区域主要集中在细胞核,部分病例中细胞质也呈现比较模糊的染色,这种染色在评价时忽略不计。MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白标记指数的平均数在良性肿瘤(3.58%、4.50%、4.42%和3.58%)、交界性肿瘤(6.52%、8.00%、9.21%和5.38%)和腺癌(25.53%、29.35%、31.18%和23.36%)中总体分布均有差异(Kruskal-Wallis检验,P<0.001)。其中MCM2、MCM5、MCM7和Ki-67蛋白在腺癌与良性肿瘤和交界性肿瘤的表达有显著差异(P<0.001),在交界性肿瘤与良性肿瘤的表达,仅MCM7蛋白有差异性(P=0.002),其余两种蛋白表达则没有差异。2、MCM2、MCM5、MCM7蛋白在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达与增殖因子Ki-67的相关性MCM2、MCM5、MCM7蛋白的表达水平与Ki-67的标记指数呈强的正相关(Spearman’s检验,相关系数均大于0.9,P<0.001)。并且在将病例分为良性肿瘤、交界性性肿瘤或者腺癌之后,这种相关性仍然存在。从相关系数来看,Ki-67LI同另外三个指标中的MCM2LI最相关。3、MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表达与卵巢上皮性癌患者临床病理特征的关系MCM2、MCM5和MCM7蛋白的标记指数随肿瘤的分级增高而增加,其在不同分化程度的肿瘤组织中总体有差异(1 vs 2 vs 3, Kruskal-Wallis检验：P均小于0.001)。MCM2、MCM5和MCM7蛋白的标记指数在不同临床分期中总体上存在差异(ⅠvsⅡvsⅢvsⅣ, Kruskal Wallis检验：P均小于0.001)。用Mann-Whitney检验观察到,在Ⅲ与Ⅳ期比较,MCM5LI、MCM7LI有差别(P<0.001),另外两个指标均无有差别。4、MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表达与卵巢上皮性癌患者预后的关系MCM2蛋白表达阴性组中位生存时间为43个月,阳性组中位生存时间为35.4个月,经Log Rank,结果统计量卡方值为8.605,p=0.003<0.05,故认为两组生存时间有差别,阴性组高。MCM5蛋白表达组阴性组中位生存时间为45.1个月,阳性组中位生存时间为34.6个月,经Log Rank,结果统计量卡方值为15.032,p=000<0.05,故认为两组生存时间有差别,阴性组高。MCM7蛋白表达阴性组中位生存时间为40.7个月,阳性组中位生存时间为29个月,经Log Rank,结果统计量卡方值为14.595,p=.000<0.05,故认为两组生存时间有差别,阴性组高。结论1、在卵巢上皮性肿瘤中,MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表达从良性到癌呈渐进性增高,有助于区分卵巢上皮性肿瘤的良恶性。2. MCM2、MCM5和MCM7蛋白的表达随卵巢癌临床分期的升高而升高,随肿瘤分化程度降低而升高。3. MCM2、MCM5和MCM7蛋白是辅助判断卵巢癌不良预后的独立的标志物。4. MCM2、MCM5和MCM7蛋白是一种可靠的细胞增殖标记物。