【摘 要】
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研究背景:十字花科植物（如甘蓝、火箭沙拉）提取物中广泛存在的芥酸（Erucin）具抗炎、抗血栓、抗癌细胞增殖的作用,该物质可能是一种潜在的抗炎和细胞保护剂。然而,芥酸在肝脏损伤中的作用没有被研究过。目的:验证芥酸缓解LPS刺激引起的肝原代细胞炎症损伤,探讨芥酸通过抑制NF-κB通路和抑制氧化应激对肝原代细胞的保护机制。方法:取8-12周龄C57BL/6J,按经典的肝原代细胞分离培养方法培养肝原代细
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研究背景:十字花科植物（如甘蓝、火箭沙拉）提取物中广泛存在的芥酸（Erucin）具抗炎、抗血栓、抗癌细胞增殖的作用,该物质可能是一种潜在的抗炎和细胞保护剂。然而,芥酸在肝脏损伤中的作用没有被研究过。目的:验证芥酸缓解LPS刺激引起的肝原代细胞炎症损伤,探讨芥酸通过抑制NF-κB通路和抑制氧化应激对肝原代细胞的保护机制。方法:取8-12周龄C57BL/6J,按经典的肝原代细胞分离培养方法培养肝原代细胞,CCK-8检测不同浓度Erucin对肝原代细胞的细胞活性的影响;设置溶剂对照组（细胞培养基中添加芥酸的溶剂）、实验对照组（细胞培养基中添加芥酸的溶剂,给予LPS刺激但无芥酸预处理）、实验组（细胞培养基中添加芥酸的溶剂,不同浓度芥酸预处理并给予LPS刺激）;Elisa检测各组细胞培养基上清中ALT和AST水平,q-PCR检测炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α基因表达;Western Blot检测NF-κB通路相关蛋白（P65和Iκ-Bα）和MAPK通路相关蛋白（P38和JNK）磷酸化水平的变化情况,比较核P65与胞浆P65水平变化;DCFH-DA检测细胞内活性氧（ROS）水平的变化。结果:（1）2.5μM,5μM,7.5μM,10μM,20μm预设浓度的Erucin孵育肝原代细胞后,与空白对照相比,细胞活性差异无统计学意义（P＞0.05）。（2）与溶剂对照组比较,实验对照组细胞培养基上清中ALT、AST浓度上升（P＜0.01）;与实验对照组比较,2.5μM,5μM,7.5μM,10μM Erucin预处理均能不同程度降低ALT、AST水平（P＜0.01）。（3）和溶剂对照组比较,实验对照组细胞IL-1β,IL-6,TNF-α基因表达水平显著上调（P＜0.01）,与实验对照组比较,实验组中不同浓度Erucin预处理下调IL-1β,IL-6,TNF-α基因表达（P＜0.01）。（4）实验对照组中NF-κB通路相关蛋白（P65和Iκ-Bα）磷酸化水平升高,Erucin预处理抑制磷酸化水平升高（P＜0.01）,10μM Erucin预处理显著抑制P65核转位;与溶剂对照组比较,实验对照组中MAPK通路相关蛋白（P38和JNK）仅JNK磷酸化水平升高（P＜0.05）,P38磷酸化水平无明显变化（P＞0.05）,Erucin对JNK和P38磷酸化水平无明显影响（P＞0.05）。（4）溶剂对照组与实验对照组细胞内活性氧水平相比无明显差异,实验组与实验对照组比较,5μM,10μM浓度Erucin预处理显著下调细胞内活性氧水平（P＜0.01）。结论:（1）芥酸可减轻LPS刺激引起的肝原代细胞损伤和炎症反应。（2）芥酸可通过抑制NF-κB通路激活引起的炎症损伤;并下调细胞内活性氧水平缓解氧化应激引起的损伤。
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