【摘 要】
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根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005，设计一对特异性引物，以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板，通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段。将其进行T-A克隆，构建pETD15质粒并进行序列测定和分析。结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框，编码805个氨基酸。与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较，同源性分别为99.9％和99.8％。序列
【机 构】
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湖南农业大学 动物医学院,长沙 湖南 410128
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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根据已发表的副猪嗜血杆菌D15基因鸟枪序列NZ_ABKM01000005，设计一对特异性引物，以副猪嗜血杆菌5型SP毒株DNA为模板，通过PCR方法扩增出长约2400多bp的片段。将其进行T-A克隆，构建pETD15质粒并进行序列测定和分析。结果表明D15基因含有一个2418bp的开放阅读框，编码805个氨基酸。与D15参考基因序列及其推导的氨基酸序列比较，同源性分别为99.9％和99.8％。序列的5端有一段18个氨基酸的信号肽，该序列C末端最后10个氨基酸残基：Q-F-Q-F-S-I-G-G-S-F，具有典型革兰氏阴性细菌外膜蛋白特征，对于蛋白定位于细菌外膜有重要意义。以pMDTD15质粒为模板，用PCR的方法扩增副猪嗜血杆菌D15基因，并将其克隆到pET-28a(+)中，构建得到pETD15原核表达质粒，将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后，用IPTG诱导重组菌，并用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。结果表明，pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达，融合蛋白分子量约为94kDa，融合蛋白能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别，具有反应原性。将表达的D15蛋白免疫昆明小鼠和豚鼠后，具有一定的保护效力。
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