【摘 要】
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传染性造血器官坏死是鲑鳟鱼类的一种严重的传染性疾病,本文建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测鱼类的传染性造血器官坏死病毒(IHNV).选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针,探针的5′端和3′端分别用FAM和TAMRA标记.将含有IHNV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线.结果表明,病毒浓度
【机 构】
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青岛出入境检验检疫局食品实验室,山东,青岛,266002 深圳出入境检验检疫局水生动物疫病国家重点
【出 处】
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中国水产学会鱼病学专业委员会第六次会员代表大会暨国际学术讨论会
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传染性造血器官坏死是鲑鳟鱼类的一种严重的传染性疾病,本文建立了Taqman实时定量RT-PCR方法检测鱼类的传染性造血器官坏死病毒(IHNV).选取IHNV病毒的N蛋白基因保守序列,利用PrimerExpress2.0软件设计引物和探针,探针的5′端和3′端分别用FAM和TAMRA标记.将含有IHNV扩增片段的质粒10倍梯度稀释,作为标准品进行反应以确定检测灵敏度并制备标准曲线.结果表明,病毒浓度介于5×106～5个拷贝之间,在7个数量级的范围内,定量RT-PCR反应都有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为5个病毒粒子.制备的标准曲线中,病毒拷贝数(X)与Ct值的关系为:Ct=-3.081gX+35.04;相关系数R2=0.9939.对该方法进行了特异性分析,引物和探针对于传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性出血性败血症(VHSV)、、鲤春血症病毒(SVCV)、GV、BIV病毒,都没有扩增反应,表现出较好的特异性.实时定量PCR检测IHNV方法的建立,在鱼病的临床检测上具有重要意义.
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