【摘 要】
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目的 颗粒细胞是卵泡内主要的功能细胞,主要发挥营养和支持卵母细胞的作用,与卵泡发育密切相关.卵巢颗粒细胞的过度损伤会引发卵泡过度闭锁进而导致卵巢功能障碍.前期研究表明冬凌草甲素可致体外胚胎发育毒性.本文以卵巢颗粒细胞为模型,进一步评价冬凌草甲素体外生殖毒性,为该药物临床应用提供参考.方法 建立未性成熟大鼠原代卵巢颗粒细胞培养模型,HE染色、免疫组化染色鉴定细胞纯度.冬凌草甲素0,7.5,10,12
【机 构】
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中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全评价研究北京市重点实验室,北京100176
【出 处】
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2016(第二届)毒性测试替代方法与转化毒理学(国际)学术研讨会暨有害结局路径(AOP)与风险评估培训会议
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目的 颗粒细胞是卵泡内主要的功能细胞,主要发挥营养和支持卵母细胞的作用,与卵泡发育密切相关.卵巢颗粒细胞的过度损伤会引发卵泡过度闭锁进而导致卵巢功能障碍.前期研究表明冬凌草甲素可致体外胚胎发育毒性.本文以卵巢颗粒细胞为模型,进一步评价冬凌草甲素体外生殖毒性,为该药物临床应用提供参考.方法 建立未性成熟大鼠原代卵巢颗粒细胞培养模型,HE染色、免疫组化染色鉴定细胞纯度.冬凌草甲素0,7.5,10,12.5,15g/ml作用24h,MTT法测定细胞生长曲线,ELISA法测定细胞内孕酮、雌二醇含量,Hochest法测定细胞凋亡,测定脂质过氧化产物(MDA),抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),过氧化氢酶(CAT)含量的变化,荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)含量的变化.结果 从12.5 g/ml浓度起冬凌草甲素可明显抑制卵巢颗粒细胞增殖(P＜0.05),显著降低颗粒细胞雌二醇水平(P＜0.05),凋亡细胞明显增加(P＜0.05).从7.5 g/ml浓度开始,冬凌草甲素可使颗粒细胞孕酮分泌水平下降(P＜0.05),ROS表达量增加(P＜0.05),MDA含量明显增加(P＜0.05),抗氧化指标SOD、GSH、GSH-PX、CAT活力下降(P＜0.05).加入自由基清除剂Trolox可明显减轻冬凌草甲素对细胞生长的抑制,减少细胞内凋亡细胞含量,减少氧化应激产物生成,并提高抗氧化物SOD、GSH、GSH-PX、CAT活力.结论 本研究实验条件下,冬凌草甲素可致卵巢颗粒细胞生长抑制,激素分泌水平下降,细胞内凋亡细胞增加,自由基增加,抗氧化功能下降,氧化应激产物增加.即冬凌草甲素可通过氧化应激途径致卵巢颗粒细胞损伤,并可能进一步导致雌性动物卵巢功能失调.
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