【摘 要】
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本文根据GenBank已登录的猪链球菌9型(SS9)cps9基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针，以定量的10倍系列稀释含cps9H部分基因的T载体重组质粒(pGEX-T-cps9H)为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作了标准曲线，经对荧光定量PCR的反应条件进行优化，建立了SS9型的TaqMan荧光定量PCR检测方法(Taqman FQ-PCR);对所建立的FQ-PCR检测方法进
【机 构】
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河南省动物疫病顶肪控制中心,河南 郑州 450008 西北农林科技大学动物科技学院,陕西 杨凌 7
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会第七届暨2008年学术研讨会理事会第二次会议
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本文根据GenBank已登录的猪链球菌9型(SS9)cps9基因保守部分序列设计合成引物和TaqMan荧光探针，以定量的10倍系列稀释含cps9H部分基因的T载体重组质粒(pGEX-T-cps9H)为标准品，进行荧光定量PCR扩增并制作了标准曲线，经对荧光定量PCR的反应条件进行优化，建立了SS9型的TaqMan荧光定量PCR检测方法(Taqman FQ-PCR);对所建立的FQ-PCR检测方法进行了敏感性、特异性和重复性实验，并对疑似猪链球菌临床样品进行了应用检测，同时与常规PCR方法进行了对比实验。结果显示：标准曲线的曲线循环阂值与模板浓度有良好的线性关系，相关系数为0.996;所建立的FQ-PcR方法检测灵敏度可达1拷贝/μL，比对照常规PCR灵敏度高100倍;FQ-PCR方法特异性高，对pGEX-T-cps9H蕈组质粒和标准SS9株扩增曲线均呈现阳性反应，而对6个对照细菌和寄生虫DNA及SS2、SS7、SS1等三个标准链球菌株DNA扩增曲线均呈现阴性反应;对小同浓度的pGEX-T-cps9H重组质粒分别重复扩增4次，重复性良好;用该方法对11份临床疑似猪链球菌感染猪组织病料进行了应用检测，结果有3份样品为阳性，与常规PCR检测方法的阳性符合率为100％。
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